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一种芦笋组织培养的方法.pdf

花匠小妙招
2025-05-11 04:42

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1、(10)申请公布号 CN 102160526 A (43)申请公布日 2011.08.24 CN 102160526 A *CN102160526A* (21)申请号 201110116711.1 (22)申请日 2011.05.06 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人连云港市农业科学院地址 222006 江苏省连云港市新浦区海连东路 26 号 (72)发明人陈振泰潘美红缪美华薛萍杨海峰孙桂乐周翔 (74)专利代理机构南京众联专利代理有限公司 32206 代理人刘喜莲 (54) 发明名称一种芦笋组织培养的方法 (57) 摘要本发明是一种芦笋组织培养。

2、的方法，其特征在于：田间选择健康的芦笋植株，剪下带茎尖的长分枝；消毒处理后接种到芦笋增殖培养基中；先避光培养，然后光照培养、扩繁；将扩繁得到的芦笋单株壮苗转入生根培养基中进行培养，生根后，将根剪去，再转入生根培养基中进行培养；最后将根在含有胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌溶液中蘸根，移入装有沙壤土的盆中，于自然光照条件下培养20-30天，得成活芦笋苗。本发明采用二步生根法，并通过适当浓度的活性炭的添加来提高芦笋生根率；在移苗过程中，通过用胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌溶液中蘸根的使用来提高移苗成活率。 (51)Int.C。

3、l. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书 2 页说明书 5 页 CN 102160527 A1/2 页 2 1. 一种芦笋组织培养的方法，其特征在于，其步骤如下：（1）田间选择健康的芦笋植株，用消毒过的剪刀剪下 4-5cm 带茎尖的长分枝；取回后在剪口处剪去一段，用体积百分比浓度为 75% 酒精加质量 - 体积百分比浓度为 0.5% 的十二烷基苯磺酸钠水溶液超声浸泡 30 秒，再加入质量 - 体积百分比浓度为 0.1% 升汞水溶液摇晃浸泡 5 分钟，无菌水洗 4 次，取出放置在消毒好的吸水纸上；（2）在无菌条件下剪下消毒。

4、处理后的芦笋茎尖，接种到芦笋增殖培养基中；先避光低温 18培养3天，然后转移到1500Lx25培养5天再将光调到2000Lx其后每20-30天就可扩繁一次；（3）将扩繁得到的芦笋单株壮苗转入生根培养基中进行培养，培养温度为 20-25 ；（4）芦笋生根后，将根剪去，再转入生根培养基中进行培养，培养温度为 20-25 ；（5）打开培养器皿的封口，再继续培养 2-3 天后将芦笋苗从培养器皿中取出，洗净根部附着的培养基，将根在含有胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌浓度为 10108CFU/ml 溶液中蘸根，移入装有沙壤土的盆中，于自然光照条件下，白天 2。

5、2-25、夜间 11-15的条件下培养 20-30 天，得成活芦笋苗；所述的芦笋增殖培养基是由以下重量配比的原料组成：单位： mg/l， NH4NO3 1600-1700 ； KNO3 1800-1900 ； KH2PO3 170-180 ； CaCl22H2O 400-450 ； MgSO47H2O 350-380 ； FeSO47H2O 26-28 ； Na2-EDTA 35-40 ； MnSO44H2O 20-25 ； ZnSO47H2O 7-10 ； H3BO3 5-7 ； KI 0.5-1 ； Na2MO42H2O 0.2-0.3 ； CuSO45H2O 0.02-0。

6、.03 ； CoCl26H2O 0.02-0.03 ；肌醇 88-100 ；甘氨酸 2-5 ；盐酸硫胺素 0.3-0.5 ；盐酸吡哆素 0.3-0.5 ；烟酸 0.3-0.5 ； 6-BA 0.1-0.5 ； NAA 0.05-0.2 ；蔗糖 30000 ；琼脂 8000-12000 ；其余为水； pH 为 5.6-5.8 ；芦笋生根培养基是由以下重量配比的原料组成：单位： mg/l， NH4NO3 800-850 ； KNO3 900-950 ； KH2PO3 85-90 ； CaCl22H2O 200-225 ； MgSO47H2O 175-190 ； FeSO4。

7、7H2O 26-28 ； Na2-EDTA 35-40 ； MnSO44H2O 20-25 ； ZnSO47H2O 7-10 ； H3BO3 5-7 ； KI 0.5-1 ； Na2MO42H2O 0.2-0.3 ； CuSO45H2O 0.02-0.03 ； CoCl26H2O 0.02-0.03 ；肌醇 88-100 ；甘氨酸 2-5 ；盐酸硫胺素 0.3-0.5 ；盐酸吡哆素 0.3-0.5 ；烟酸 0.3-0.5 ； IBA 0.1-0.5 ； NAA 0.1-1.0 ； IAA 0.1-1.0 ；权利要求书 CN 102160526 A CN 102160527 。

8、A2/2 页 3 6- 糠氨基嘌呤 0.05-0.2 ；蔗糖 30000 ；琼脂 8000-12000 ；其余为纯净水； pH 5.6-5.8 ；所述的芦笋生根培养基除含有芦笋生根培养基 I 中所述的重量配比的全部原料外，还含有质量 - 体积百分比为 0.1-0.3% 的活性炭；其 pH 为 5.6-5.8。权利要求书 CN 102160526 A CN 102160527 A1/5 页 4 一种芦笋组织培养的方法技术领域 0001 本发明涉及一种植物的培养方法，特别是一种芦笋组织培养方法。背景技术 0002 芦笋又名石刁柏、龙须菜，是国际公认的 “蔬菜之王。

9、” ，因芦笋含有丰富的营养物质，而且具有很好的保健和医疗作用，喜爱食用芦笋的人逐年增多，在国际市场上芦笋产品的需求数量也日益增加，并形成长期处于供不应求的状况。 0003 生产上采用的优良 F1 代芦笋种子一直依靠国外进口，价格昂贵。利用组织培养技术进行芦笋的无性快繁生产，既可以解决芦笋的种性退化，又可以培育大量的芦笋优质种苗，满足生产的需要；由于芦笋雄株比雌株产量高 20% 30% ，实现种苗全雄化，便可在相同栽培条件下获得增收。应用组织培养技术建立优良雄株无性系，不仅可以直接提供生产用苗，而且通过筛选优良种株，可以繁育生产用的一代杂交种子。但是。

10、芦笋组培苗生根率低和移栽成活率低的问题普遍存在，极大地限制了组培效果。发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种简单易行的、可有效提高芦笋生根率及移栽成活率的芦笋组织培养的方法。 0005 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种芦笋组织培养的方法，其特点是，其步骤如下：（1）田间选择健康的植株，用酒精擦拭过的剪刀剪下 4-5cm 长分枝（带茎尖）；取回后在剪口处剪去一段，用体积百分比浓度为 75% 酒精加质量 - 体积百分比浓度为 0.5% 的十二烷基苯磺酸钠水溶液超声浸泡 30 秒，再加入质。

11、量 - 体积百分比浓度为 0.1% 升汞水溶液摇晃浸泡 5 分钟（摇晃），无菌水洗 4 次，取出放置在消毒好的吸水纸上；（2）在无菌条件下剪下消毒处理后的芦笋茎尖，接种到芦笋增殖培养基中；先避光低温 18培养 3 天，然后转移到 1500Lx25培养 5 天再将光调到 2000Lx 其后每 20-30 天就可扩繁一次；（3）将扩繁得到的芦笋单株壮苗转入生根培养基中进行培养，培养温度为 20-25 ；（4）芦笋生根后，将根剪去，再转入生根培养基中进行培养，培养温度为 20-25 ；（5）打开培养器皿的封口，再继续培养 1-2 天后将芦笋苗从培养。

12、器皿中取出，洗净根部附着的培养基，用胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌浓度为 10108CFU/ml 溶液中蘸根，移入装有沙土的盆中，于自然光照条件下，白天 22-25、夜间 11-15的条件下培养 20-30 天，得成活芦笋苗；所述的芦笋增殖培养基是由以下重量配比的原料组成：单位： mg/l， NH4NO3 1600-1700 ； KNO3 1800-1900 ； KH2PO3 170-180 ； CaCl22H2O 400-450 ；说明书 CN 102160526 A CN 102160527 A2/5 页 5 MgSO47H2O 350-380 ； Fe。

13、SO47H2O 26-28 ； Na2-EDTA 35-40 ； MnSO44H2O 20-25 ； ZnSO47H2O 7-10 ； H3BO3 5-7 ； KI 0.5-1 ； Na2MO42H2O 0.2-0.3 ； CuSO45H2O 0.02-0.03 ； CoCl26H2O 0.02-0.03 ；肌醇 88-100 ；甘氨酸 2-5 ；盐酸硫胺素 0.3-0.5 ；盐酸吡哆素 0.3-0.5 ；烟酸 0.3-0.5 ； 6-BA 0.1-0.5 ； NAA 0.05-0.2 ；蔗糖 30000 ；琼脂 8000-12000 ；其余为水； pH 为 5.6-5.8 。

14、；芦笋生根培养基是由以下重量配比的原料组成：单位： mg/l， NH4NO3 800-850 ； KNO3 900-950 ； KH2PO3 85-90 ； CaCl22H2O 200-225 ； MgSO47H2O 175-190 ； FeSO47H2O 26-28 ； Na2-EDTA 35-40 ； MnSO44H2O 20-25 ； ZnSO47H2O 7-10 ； H3BO3 5-7 ； KI 0.5-1 ； Na2MO42H2O 0.2-0.3 ； CuSO45H2O 0.02-0.03 ； CoCl26H2O 0.02-0.03 ；肌醇 88-100 ；甘氨酸 2-5。

15、；盐酸硫胺素 0.3-0.5 ；盐酸吡哆素 0.3-0.5 ；烟酸 0.3-0.5 ； IBA 0.1-0.5 ； NAA 0.1-1.0 ； IAA 0.1-1.0 ； 6- 糠氨基嘌呤 0.05-0.2 ；蔗糖 30000 ；琼脂 8000-12000 ；其余为纯净水； pH 5.6-5.8 ；所述的芦笋生根培养基除含有芦笋生根培养基 I 中所述的重量配比的全部原料外，还含有 0.1%-0.3% 的活性炭（水溶液）；其 pH 为 5.6-5.8。 0006 本发明采用二步生根法，并通过适当浓度的活性炭的添加来提高芦笋生根率；在移苗过程中，通过用胶质芽孢杆。

16、菌和细黄链霉北京亚种菌浓度为 10108CFU/ml 溶液中蘸根的使用来提高移苗成活率。 0007 组培苗根系有避光生长的特性，使用活性碳后，可提供暗环境，降低光照为培养基中光敏性生长素的积累提供合适的环境；另外，活性炭是一种较强的吸附剂，可以吸附培养物分泌到培养基中的酚、醌等有害物质，从而有效地减轻褐变；同时 AC 也是促使胚状细胞发生生长的诱致剂，可以诱发胚状细胞发生有利于提高组培效率。AC 与激素配比对提高生根率有很大的影响。 0008 细黄链霉菌北京亚种（5406），拉丁学名： Streptomyces microflavus，链霉菌属（S。

17、treptomyces），是最高等的放线菌，其经济用途有：产生纺锤菌素；产生螺旋霉素，对革兰氏阳性及阴性细菌、酵母菌、丝状真菌都有抑制作用。常用于农业上防病保苗；同时可作菌肥，能转化土壤中氮磷元素，提高土壤肥力，并具有产生类吲哚乙酸和赤霉素物质，促进根的生长和细胞伸长作用，在作物生长上面有刺激作物生长现象的表观作用。说明书 CN 102160526 A CN 102160527 A3/5 页 6 0009 胶质芽孢杆菌，拉丁学名： Bacillus mucilaginosus Krassilnikov ，细菌，其经济用途有：提高土壤有。

18、效磷钾的转化和分泌类激素物质促进根部发育和产生氨基多糖类物质，这类物质具有抑制有害微生物过度生长作用，有利于减少移栽的烂苗和提高组培苗快速复壮。本试验利用复合微生物菌剂有效活菌数 80 亿 / 克、水分 12%、粉剂细度 3mm 左右，用量为 1000 克 /10L 水形成均浆然后蘸根，形成人工感染促进进一步形成菌根，达到控制根部微生态环境使得根系生长，抑制土传病害。具体实施方式 0010 以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。 0011 实施例 1。一种芦笋组织培养的方法，其步骤如下：（1）。

19、田间选择健康的植株，用酒精擦拭过的剪刀剪下 4cm 长分枝（带茎尖）；取回后在剪口处剪去一段，用体积百分比浓度为 75% 酒精加质量 - 体积百分比浓度为 0.5% 的十二烷基苯磺酸钠水溶液超声浸泡 30 秒，再加入质量 - 体积百分比浓度为 0.1% 升汞水溶液摇晃浸泡 5 分钟（摇晃），无菌水洗 4 次，取出放置在消毒好的吸水纸上；（2）在无菌条件下剪下消毒处理后的芦笋茎尖，接种到芦笋增殖培养基中；先避光低温 18培养 3 天，然后转移到 1500Lx25培养 5 天再将光调到 2000Lx 其后每 20 天就可扩繁一次；（3）将扩繁得到。

20、的芦笋单株壮苗转入生根培养基中进行培养，培养温度为 20 ；（4）芦笋生根后，将根剪去，再转入生根培养基中进行培养，培养温度为 20 ；（5）打开培养器皿的封口，再继续培养 2 天后将芦笋苗从培养器皿中取出，洗净根部附着的培养基，将根在用胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌浓度为 10108CFU/ml 溶液中蘸根，移入装有沙壤土的盆中，于自然光照条件下，白天 22、夜间 11的条件下培养 20 天，得成活芦笋苗；所述的芦笋增殖培养基是由以下重量配比的原料组成：单位： mg/l， NH4NO3 1600 ； KNO3 1800 ； KH2PO3 170。

21、； CaCl22H2O 400 ； MgSO47H2O 350 ； FeSO47H2O 26 ； Na2-EDTA 35 ； MnSO44H2O 20 ； ZnSO47H2O 7 ； H3BO3 5 ； KI 0.5 ； Na2MO42H2O 0.2 ； CuSO45H2O 0.02 ； CoCl26H2O 0.02 ；肌醇 88 ；甘氨酸 2 ；盐酸硫胺素 0.3 ；盐酸吡哆素 0.3 ；烟酸 0.3 ； 6-BA 0.1 ； NAA 0.05 ；蔗糖 30000 ；琼脂 8000 ；其余为水； pH 为 5.6 ；芦笋生根培养基是由以下重量配比的原料组成：单位：。

22、 mg/l， NH4NO3 800 ； KNO3 900 ；说明书 CN 102160526 A CN 102160527 A4/5 页 7 KH2PO3 85 ； CaCl22H2O 200 ； MgSO47H2O 175 ； FeSO47H2O 26 ； Na2-EDTA 35 ； MnSO44H2O 20 ； ZnSO47H2O 7 ； H3BO3 5 ； KI 0.5 ； Na2MO42H2O 0.2 ； CuSO45H2O 0.02 ； CoCl26H2O 0.02 ；肌醇 88 ；甘氨酸 2 ；盐酸硫胺素 0.3 ；盐酸吡哆素 0.3 ；烟酸 0.3 ； IBA 0。

23、.1 ； NAA 0.1 ； IAA 0.1 ； 6- 糠氨基嘌呤 0.05 ；蔗糖 30000 ；琼脂 8000 ；其余为纯净水； pH 5.6 ；所述的芦笋生根培养基除含有芦笋生根培养基 I 中所述的重量配比的全部原料外，还含有质量 - 体积百分比为 0.1% 的活性炭；其 pH 为 5.6。 0012 实施例 2。一种芦笋组织培养的方法，其步骤如下：（1）田间选择健康的植株，用酒精擦拭过的剪刀剪下 5cm 长分枝（带茎尖）；取回后在剪口处剪去一段，用体积百分比浓度为 75% 酒精加质量 - 体积百分比浓度为 0.5% 的十二烷基苯磺酸钠水溶液超声浸泡。

24、 30 秒，再加入质量 - 体积百分比浓度为 0.1% 升汞水溶液摇晃浸泡 5 分钟（摇晃），无菌水洗 4 次，取出放置在消毒好的吸水纸上；（2）在无菌条件下剪下消毒处理后的芦笋茎尖，接种到芦笋增殖培养基中；先避光低温 18培养 3 天，然后转移到 1500Lx25培养 5 天再将光调到 2000Lx 其后每 30 天就可扩繁一次；（3）将扩繁得到的芦笋单株壮苗转入生根培养基中进行培养，培养温度为 25 ；（4）芦笋生根后，将根剪去，再转入生根培养基中进行培养，培养温度为 25 ；（5）打开培养器皿的封口，再继续培养 2-3 天后将芦笋苗从。

25、培养器皿中取出，洗净根部附着的培养基，将根在用胶质芽孢杆菌和细黄链霉北京亚种菌浓度为 10108CFU/ml 溶液中蘸根，移入装有沙壤土的盆中，于自然光照条件下，白天 25、夜间 15的条件下培养 30 天，得成活芦笋苗；所述的芦笋增殖培养基是由以下重量配比的原料组成：单位： mg/l， NH4NO3 1700 ； KNO3 1900 ； KH2PO3 180 ； CaCl22H2O 450 ； MgSO47H2O 380 ； FeSO47H2O 28 ； Na2-EDTA 40 ； MnSO44H2O 25 ； ZnSO47H2O 10 ； H3BO3 7 ； K。

26、I 1 ； Na2MO42H2O 0.3 ； CuSO45H2O 0.03 ； CoCl26H2O 0.03 ；肌醇 100 ；甘氨酸 2 ；盐酸硫胺素 0.5 ；盐酸吡哆素 0.5 ；烟酸 0.5 ； 6-BA 0.5 ；说明书 CN 102160526 A CN 102160527 A5/5 页 8 NAA 0.2 ；蔗糖 30000 ；琼脂 12000 ；其余为水； pH 为 5.8 ；芦笋生根培养基是由以下重量配比的原料组成：单位： mg/l， NH4NO3 850 ； KNO3 950 ； KH2PO3 90 ； CaCl22H2O 225 ； MgS。

27、O47H2O 190 ； FeSO47H2O 28 ； Na2-EDTA 40 ； MnSO44H2O 25 ； ZnSO47H2O 10 ； H3BO3 7 ； KI 1 ； Na2MO42H2O 0.3 ； CuSO45H2O 0.03 ； CoCl26H2O 0.03 ；肌醇 100 ；甘氨酸 5 ；盐酸硫胺素 0.5 ；盐酸吡哆素 0.5 ；烟酸 0.5 ； IBA 0.5 ； NAA 1.0 ； IAA 1.0 ； 6- 糠氨基嘌呤 0.2 ；蔗糖 30000 ；琼脂 12000 ；其余为纯净水； pH 5.8 ；所述的芦笋生根培养基除含有芦笋生根培养基 I 中所述的重量配比的全部原料外，还含有质量 - 体积百分比为 0.3% 的活性炭；其 pH 为 5.8。说明书 CN 102160526 A 。