温肾通督针法对抑郁症肾阳虚证模型大鼠相关神经递质及cAMP－RAF1信号通路的影响

• 花匠小妙招
• 2024-11-01 11:02

摘要

目的

通过建立抑郁症肾阳虚证模型大鼠，探究温肾通督针法的温肾调神功效，揭示温肾通督针法温阳解郁的作用机制。

译

方法

将大鼠任意分为正常组、模型组、温针组、抑制剂组、温针＋抑制剂组，每组各6只。除正常组外，其余各组采用氢化可的松激素注射(肌肉注射，25 mg/kg)结合慢性不可预见性温和刺激进行造模。温针组和温针＋抑制剂组采用针刺和艾灸2种方式进行干预；温针＋抑制剂组和抑制剂组在取材前24 h灌胃给药ESI－09[10 mg/kg，环磷酸腺苷(cAMP)－RAF1信号通路抑制剂]。造模及干预前后，观察大鼠一般情况，采用强迫游泳实验、水迷宫实验观察大鼠行为学变化。酶联免疫吸附测定法检测脑源性神经营养因子(BDNF)、5－羟色胺(5－HT)、多巴胺(DA)及去甲肾上腺素(NE)含量。蛋白质印迹法检测大鼠海马cAMP-RAF1信号通路中cAMP、RAS相关蛋白1(RAP1)和RAF1的蛋白表达。

译

结果

干预后，与正常组比较，模型组、温针组、抑制剂组和温针＋抑制剂组的体质量均降低(P<0.01)，模型组、抑制剂组的肛温均降低(P<0.01)。与模型组比较，抑制剂组的体质量、肛温降低(P<0.05，P<0.01)，温针组、温针＋抑制剂组的体质量、肛温升高(P<0.05，P<0.01)。干预后，与正常组比较，模型组、抑制剂组和温针＋抑制剂组的强迫游泳不动时间均延长(P<0.01)，温针组强迫游泳不动时间差异无统计学意义。与模型组比较，抑制剂组强迫游泳不动时间延长(P<0.01)，温针组、温针＋抑制剂组强迫游泳不动时间均缩短(P<0.05，P<0.01)。干预后，与正常组比较，模型组、温针组、抑制剂组和温针＋抑制剂组平台潜伏期、平台区域穿梭次数、平台象限时间占比均降低(P<0.01)。与模型组比较，抑制剂组平台潜伏期、平台区域穿梭次数、平台象限时间占比均降低(P<0.01)，温针组、温针＋抑制剂组平台潜伏期、平台区域穿梭次数、平台象限时间占比均升高(P<0.01)。模型组大鼠BDNF、5－HT、DA、NE含量及海马cAMP、RAP1、RAF1蛋白表达均低于正常组(P<0.01)，温针组大鼠BDNF、5－HT、DA、NE含量及海马cAMP、RAP1、RAF1蛋白表达均高于模型组(P<0.01)。

译

结论

温肾通督针法可能通过调控cAMP-RAF1信号通路，使海马功能得以恢复，从而改善大鼠抑郁样行为。

译

Abstract

Objective

By estabtishing depression with kidney yang deficiency syndrome model rats, to explore the effect of warming kidney for dredging governor channel acupuncture method on warming kidney and regulating spirit, and reveal the mechanism underlying the warming kidney for dredging governor channel acupuncture method.

译

Methods

The rats were randomly divided into the normal group, model group, warm needle group, inhibitor group, and warm needle combined with inhibitor group, with six rats per group. Except for the normal group, the other groups were given a hydrocortisone hormone injection (intramuscular injection, 25 mg/kg) combined with chronic unpredictable mild stimulation for modeling. Acupuncture and moxibustion were used in the warm needle group and warm needle combined with inhibitor group. The rats in the warm needle combined with inhibitor group and inhibitor group were orally treated with ESI-09 (cAMP-RAF1 signal pathway inhibitor) at a dose of 10 mg/kg 24 h before being sacrificed. Before and after modeling and intervention, the general conditions of rats were observed, and forced swimming and water maze tests were used to observe the behavioral changes in rats. The levels of brain-derived neurotrophic factor (BDNF), 5-hydroxytryptophan (5-HT), dopamine (DA), and norepinephrine (NE) were determined by ELISA. Western blotting was used to detect the expression of cAMP, RAS-related protein 1 (RAP1), and RAF1 proteins in the cAMP-RAF1 signal pathway.

译

Results

After intervention, compared with the normal group, the body weights of the model group, warm needle group, inhibitor group, and warm needle combined with inhibitor group were decreased (P<0.01), as were the anal temperatures of the model group and inhibitor group (P<0.01). Compared with the model group, the body weight and anal temperature of the inhibitor group were decreased (P<0.05, P<0.01), while those of the warm needle group and warm needle combined with inhibitor group were increased (P<0.05, P<0.01). After intervention, compared with the normal group, the forced swimming immobility time of the model group, the inhibitor group and the warm needle combined with inhibitor group was prolonged (P<0.01), and there was no significant difference in the forced swimming immobility time of the warm needle group. Compared with the model group, the forced swimming immobility time of the inhibitor group was prolonged (P<0.01), and the forced swimming immobility time of the warm needle group and warm needle combined with inhibitor group was shortened (P<0.05, P<0.01). After intervention, compared with the normal group, the platform latency, shuttle times of the platform area, and the platform quadrant time ratio of the model group, warm needle group, inhibitor group and warm needle combined with inhibitor group were all decreased (P<0.01). Compared with the model group, the platform latency, shuttle times of the platform area, and the platform quadrant time ratio of the inhibitor group were decreased (P<0.01), but were increased in the warm needle group and warm needle combined with inhibitor group (P<0.01). The contents of BDNF, 5-HT, DA, and NE, and the protein expressions of cAMP, RAP1, and RAF1 in the hippocampus of the model group were lower than those of the normal group (P<0.01), but those were higher in the warm needle group compared with the model group (P<0.01).

译

Conclusion

Warming kidney for dredging governor channel acupuncture may restore hippocampal function by regulating the cAMP-RAF1 signal pathway, thus improving depression-like behavior in rats.

译

抑郁症主要表现为持续性情绪低落、思维迟缓和认知障碍，是一种患病率高、治愈率低的心境障碍疾病。肾阳虚证与抑郁症关系密切[

1]，是其常见的证候类型。抑郁症肾阳虚证除抑郁症的临床表现外，还可有畏寒肢冷、腰膝酸软等肾阳虚证的症状。抑郁症的治疗首选选择性5-羟色胺再摄取抑制剂，但长期服用会对身体功能造成不良影响[2]。针灸具有调节气血阴阳之功效，在抑郁症的临床应用和实验研究方面已取得重要进展[3-4]。本课题组前期临床研究证实，温肾通督针法所选取的百会、印堂、腰阳关、命门4穴是抑郁症肾阳虚证患者的阳性反应腧穴，能够在体表反映患者的病理变化[5]。因此，本研究希望在探索抑郁症肾阳虚证发病机制的同时，验证温肾通督针法的疗效，并探讨其作用机制，为日后临床治疗提供依据与方法。

译

1 材料

1.1 动物

SPF级SD大鼠30只，雌雄各半，体质量(250±50) g，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，动物生产许可证号：SCXK(辽)2015-0001。所有大鼠饲养于辽宁中医药大学实验动物中心，适应性喂养7 d，常规颗粒饲料喂养，自由饮水，12 h昼夜节律。

译

1.2 伦理审查

本实验已通过辽宁中医药大学实验动物伦理委员会审查，伦理审查批件编号：21000042020008。

译

1.3 主要试剂与仪器

氢化可的松注射液(山西省芮城县红宝兽药有限责任公司，批号：04010269)，ESI-09(上海瀚香生物科技有限公司，批号：BCP1772402348)。脑源性神经营养因子(BDNF)检测试剂盒、去甲肾上腺素(NE)检测试剂盒、多巴胺(DA)检测试剂盒、5-羟色胺(5-HT)检测试剂盒(武汉克隆科技股份有限公司，批号：SEA011Ra、CEA907Ge、CEA851G、CEA808Ge)。BCA蛋白定量测定试剂盒(南京碧云天生物技术有限公司，批号：P0012 S)，SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(南京碧云天生物技术有限公司，批号：P0012A)。环磷酸腺苷(cAMP)抗体、RAS相关蛋白1(RAP1)抗体、RAF1抗体、β-actin抗体、山羊抗兔二抗(英国Abcam公司，批号：ab76238、ab175329、ab181115、ab8226、ab13868)。

译

Multiskan Mk3酶标仪(美国Thermo Scientific公司)，Sartorius group电子天平(德国Leica公司)，BX51显微图像分析系统(日本Olympus公司)。

译

2 方法

2.1 分组

将大鼠任意分为正常组、模型组、温针组、抑制剂组、温针＋抑制剂组，每组各6只。

译

2.2 造模

除正常组外，其余各组采用氢化可的松激素注射结合慢性不可预见性温和刺激进行造模。慢性不可预见性温和刺激包括：断粮24 h、断水24 h、日夜颠倒24 h、摇箱5 min、湿笼24 h、热水游泳5 min、冰水游泳5 min、夹尾3 min。每天随机给予2种刺激，连续21 d。第8～21天，大鼠四肢部位进行氢化可的松肌肉注射(25 mg/kg)，每日1次，每日更换肢体注射部位。正常组大鼠采用等体积生理盐水进行四肢肌肉注射。造模结束后观察大鼠体质量、肛温变化，并通过强迫游泳实验、水迷宫实验检测行为学变化，大鼠出现体质量减轻、肛温降低，以及强迫游泳实验不动时间延长、水迷宫实验相关行为学检测指标下降，表明抑郁症肾阳虚证模型复制成功。

译

2.3 干预方法

正常组大鼠正常饲养，不做干预。模型组和抑制剂组大鼠每日用黑色布袋包裹固定20 min，连续21 d。温针组和温针＋抑制剂组大鼠用黑色布袋包裹固定后，采用针刺和艾灸2种方式进行干预。所选穴位定位参照《实验针灸学》，平刺“百会”“印堂”，斜刺“命门”“腰阳关”[

4]，针刺深度为5 mm，强度以大鼠的耐受度为基准；将艾绒搓团捻于针柄，距离穴位2 cm。针刺和艾灸每日1次，每次20 min，连续治疗21 d。温针＋抑制剂组和抑制剂组在取材前24 h灌胃给药cAMP-RAF1信号通路抑制剂ESI-09，剂量为10 mg/kg。

译

2.4 一般情况观察

观察大鼠的食量、运动情况、皮毛光泽情况、体质量、肛温。

译

2.5 行为学检测

实验干预前后分别进行强迫游泳实验，每组6只。将纯净水置于水桶，水温控制在(25±2)℃，水深40 cm左右。安静环境下将大鼠放入水桶，记录大鼠在5 min内的不动时间，用以评价大鼠的绝望状态。

译

水迷宫实验使大鼠通过学习寻找水中的平台，用以评价大鼠的认知能力。实验干预前后分别进行水迷宫实验，每组6只。水迷宫实验开始前，水池处于避光环境，注水，水温调节为(25±2)℃，将平台置于水池中。仪器开启并调试后，将大鼠头面对水池壁，随机从东南西北4个方向置于水中，开始记录大鼠循行路线和找到平台所需时间。在训练时，若大鼠在1 min内没有找到平台，可主动引导大鼠抵达平台，让其在平台停留30 s再移开。连续训练1周，每只大鼠每日训练4次，训练间隔30 min。最后一次训练后，正式开始水迷宫实验，移除平台，任选一相同入水点将大鼠放入池中，记录实验动物的平台潜伏期、平台区域穿梭次数和平台象限时间占比(平台所在象限游泳时间/总时间)。实验完毕后，保存视频录像，采用Noldus软件进行结果分析。

译

2.6 取材

造模21 d后，大鼠禁食24 h，10%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，将采集后的血液4 ℃、离心半径8 cm、2 000 r/min离心15 min，吸取上清液。大鼠断头取海马。血清及海马组织置于－80 ℃冰箱中备用。

译

2.7 酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清BDNF、5－HT、DA、NE含量

根据试剂盒说明书检测大鼠血清中BDNF、5-HT、DA、NE的水平。

译

2.8 蛋白质印迹法检测大鼠海马cAMP、RAP1和RAF1蛋白表达

取冰箱备存的海马组织称重，BCA法检测蛋白浓度。制胶、制样，电泳后转膜，转膜时间视目的蛋白分子大小而定。5%脱脂牛奶封闭60 min，加入一抗(稀释比例均为1∶1 000)，室温孵育15 min，4 ℃摇床过夜。TBST溶液洗膜3次后加入二抗(1∶10 000)，室温轻摇60 min，TBST溶液洗膜3次，ECL曝光成像，运用Image J软件分析蛋白条带灰度值。

译

2.9 统计方法

数据采用SPSS 22.0软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料以均值±标准差(x¯±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较方差齐采用LSD法，方差不齐采用Dunnett T3分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

译

3 结果

3.1 温肾通督针法对大鼠一般情况的影响

造模后，与正常组比较，模型组和抑制剂组大鼠食量减少，懒动嗜睡，皮毛易脱落、缺少光泽，大便稀溏。经温肾通督针法干预后的温针组和温针＋抑制剂组的上述症状有所改善。

译

干预前，各组体质量、肛温差异无统计学意义(P>0.05)。干预后，与正常组比较，模型组、温针组、抑制剂组和温针＋抑制剂组的体质量均降低(P<0.01)，模型组、抑制剂组肛温均降低(P<0.01)。与模型组相比，抑制剂组体质量、肛温降低(P<0.05，P<0.01)，温针组、温针＋抑制剂组体质量、肛温升高(P<0.05，P<0.01)。与温针组相比，抑制剂组、温针＋抑制剂组体质量均降低(P<0.01)，抑制剂组肛温降低(P<0.01)，温针＋抑制剂组肛温差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。

译

表1  各组大鼠干预前后体质量及肛温变化(x¯±s；n＝6)

Table 1  Changes of body weight and anal temperature before and after intervention in each group (x¯±s; n＝6)

组别Group体质量Body weight(g)肛温Anal temperature(℃)干预前Before intervention干预后After intervention干预前Before intervention干预后After intervention 正常组Normal group 243.83±5.78 249.33±15.96 34.32±0.25 34.50±0.26 模型组Model group 241.83±7.08 136.83±11.11** 34.48±0.45 32.82±0.41** 温针组Warm needle group 248.67±14.32 210.33±25.49**★★ 34.48±0.48 34.00±1.01★★ 抑制剂组Inhibitor group 241.67±4.13 114.33±3.83**★△△ 34.55±0.30 31.55±0.30**★★△△ 温针＋抑制剂组Warm needle combined with inhibitor group 241.00±4.86 159.50±13.31**★△△ 34.40±0.62 33.95±0.53★★ F 0.892 74.694 0.252 25.999 P 0.483 <0.001 0.905 <0.001

注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，★P<0.05，★★P<0.01；与温针组比较，△△P<0.01。

Note: **P<0.01 compared with the normal group; ★P<0.05, ★★P<0.01 compared with the model group; △△P<0.01 compared with the warm needle group.

3.2 温肾通督针法对大鼠强迫游泳实验的影响

干预前，各组大鼠强迫游泳不动时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。干预后，与正常组比较，模型组、抑制剂组和温针＋抑制剂组的强迫游泳不动时间均延长(P<0.01)，温针组强迫游泳不动时间差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比，抑制剂组强迫游泳不动时间延长(P<0.01)，温针组、温针＋抑制剂组强迫游泳不动时间均缩短(P<0.05，P<0.01)。与温针组相比，抑制剂组、温针＋抑制剂组强迫游泳不动时间均延长(P<0.01)。结果见表2。

译

表2  各组大鼠干预前后强迫游泳不动时间比较(s；x¯±s；n＝6)

Table 2  Comparison of the forced swimming immobile time before and after intervention in each group (s；x¯±s; n＝6)

组别Group干预前Before intervention干预后After intervention 正常组Normal group 145.67±4.08 144.67±3.93 模型组Model group 146.00±4.24 290.17±3.76** 温针组Warm needle group 145.50±6.63 179.50±52.79★★ 抑制剂组Inhibitor group 146.00±3.35 369.33±7.06**★★△△ 温针＋抑制剂组Warm needle combined with inhibitor group 145.33±2.07 250.17±39.82**★△△ F 0.028 53.689 P 0.998 <0.001

注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，★P<0.05，★★P<0.01；与温针组比较，△△P<0.01。

Note：**P<0.01 compared with the normal group; ★P<0.05, ★★P<0.01 compared with the model group; △△P<0.01 compared with the warm needle group.

3.3 温肾通督针法对大鼠水迷宫实验的影响

干预前，各组大鼠平台潜伏期、平台区域穿梭次数、平台象限时间占比差异无统计学意义(P>0.05)。干预后，与正常组比较，模型组、温针组、抑制剂组和温针＋抑制剂组平台潜伏期、平台区域穿梭次数、平台象限时间占比均降低(P<0.01)。与模型组比较，抑制剂组平台潜伏期、平台区域穿梭次数、平台象限时间占比均降低(P<0.01)，温针组、温针＋抑制剂组平台潜伏期、平台区域穿梭次数、平台象限时间占比均升高(P<0.01)。与温针组比较，抑制剂组平台潜伏期、平台区域穿梭次数、平台象限时间占比均降低(P<0.01)，温针＋抑制剂组平台区域穿梭次数、平台象限时间占比降低(P<0.05)。结果见表3。

译

表3  各组大鼠干预前后平台潜伏期、平台区域穿梭次数和平台象限时间占比比较(x¯±s；n＝6)

Table 3  Comparison of the platform latency, shuttle times of the platform area, and the platform quadrant time ratio before and after intervention in each group (x¯±s; n＝6)

组别Group平台潜伏期Platform latency (s)平台区域穿梭次数(次)Shuttle times of platform area (times)平台象限时间占比Platform quadrant time ratio (%)干预前Before intervention干预后After intervention干预前Before intervention干预后After intervention干预前Before intervention干预后After intervention 正常组Normal group 36.05±0.57 36.17±0.43 5.50±0.55 5.50±0.55 26.29±0.22 26.22±0.31 模型组Model group 36.12±0.45 23.91±0.54** 5.50±1.05 2.67±0.52** 26.29±0.35 16.23±0.37** 温针组Warm needle group 36.09±0.48 33.06±0.53**★★ 5.33±1.51 4.50±0.55**★★ 26.20±0.27 24.44±0.27**★★ 抑制剂组Inhibitor group 36.01±0.54 22.06±1.24**★★△△ 5.50±1.05 1.67±0.52**★★△△ 26.25±0.32 14.88±0.48**★★△△ 温针＋抑制剂组Warm needle combined with inhibitor group 36.13±0.46 32.58±0.16**★★ 5.00±0.63 3.83±0.41**★★△ 26.23±0.25 23.89±0.66**★★△ F 0.058 498.335 0.274 52.372 0.097 834.144 P 0.993 <0.001 0.892 <0.001 0.982 <0.001

注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，★★P<0.01；与温针组比较，△P<0.05，△△P<0.01。

Note：**P<0.01 compared with the normal group; ★★P<0.01 compared with the model group; △P<0.05, △△P<0.01 compared with the warm needle group.

3.4 温肾通督针法对大鼠BDNF、5－HT、DA、NE的影响

与正常组比较，模型组、温针组、抑制剂组和温针＋抑制剂组的BDNF、5-HT、DA、NE含量均降低(P<0.01)。与模型组比较，抑制剂组的BDNF、5-HT、DA、NE含量差异无统计学意义(P>0.05)，温针组、温针＋抑制剂组的BDNF、5-HT、DA、NE含量均增加(P<0.01)。与温针组相比，抑制剂组、温针＋抑制剂组的BDNF、5-HT、DA、NE含量均降低(P<0.01)。结果见表4。

译

表4  各组大鼠血清BDNF、5－HT、DA、NE的含量(x¯±s；n＝6)

Table 4  Contents of BDNF, 5－HT, DA and NE in the serum of rats in each group (x¯±s; n＝6)

组别GroupBDNF(pg/L)5－HT(ng/L)DA(pg/L)NE(pg/L) 正常组Normal group 0.178±0.014 0.013±0.001 1.851±0.172 0.209±0.026 模型组Model group 0.016±0.01** 0.001±0.002** 0.208±0.029** 0.020±0.003** 温针组Warm needle group 0.076±0.004**★★ 0.010±0.001**★★ 1.338±0.177**★★ 0.136±0.024**★★ 抑制剂组Inhibitor group 0.015±0.008**△△ 0.001±0.002**△△ 0.192±0.040**△△ 0.021±0.003**△△ 温针＋抑制剂组Warm needle combined with inhibitor group 0.029±0.009**★★△△ 0.005±0.002**★★△△ 0.699±0.067**★★△△ 0.072±0.007**★★△△ F 11.013 4.832 3.888 25.074 P <0.001 <0.001 <0.001 <0.001

注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，★★P<0.01；与温针组比较，△△P<0.01。

Note：**P<0.01 compared with the normal group; ★★P<0.01 compared with the model group; △△P<0.01 compared with the warm needle group.

3.5 温肾通督针法对大鼠cAMP-RAF1信号通路的影响

与正常组比较，模型组、温针组、抑制剂组和温针＋抑制剂组的RAF1表达水平均下调(P<0.01)，模型组、抑制剂组和温针＋抑制剂组的cAMP和RAP1表达水平均下调(P<0.01)，温针组的cAMP和RAP1表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较，抑制剂组的cAMP、RAP1、RAF1蛋白表达均下调(P<0.01)，温针组的cAMP、RAP1、RAF1蛋白表达均上调(P<0.01)，温针＋抑制剂组的cAMP、RAP1蛋白表达上调(P<0.05，P<0.01)，温针＋抑制剂组的RAF1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与温针组比较，抑制剂组和温针＋抑制剂组的cAMP、RAP1、RAF1蛋白表达水平均下调(P<0.01)。结果见表5、图1。

译

图1  各组大鼠海马cAMP、RAP1、RAF1蛋白质印迹图

Fig.1  Western blotting bands of cAMP, RAP1 and RAF1 proteins in the hippocampus of rats in each group

1：正常组；2：模型组；3：温针组；4：抑制剂组；5：温针＋抑制剂组。

1: Normal group; 2: Model group; 3: Warm needle group; 4: Inhibitor group; 5: Warm needle combined with inhibitor group.

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表5  各组大鼠海马cAMP、RAP1、RAF1蛋白表达(x¯±s；n＝6)

Table 5  Expressions of cAMP, RAP1 and RAF1 protein in the hippocampus of rats in each group (x¯±s; n＝6)

组别GroupcAMPRAP1RAF1 正常组Normal group 0.570±0.064 0.563±0.059 0.572±0.057 模型组Model group 0.380±0.030** 0.368±0.044** 0.375±0.041** 温针组Warm needle group 0.526±0.047★★ 0.575±0.026★★ 0.506±0.046**★★ 抑制剂组Inhibitor group 0.247±0.024**★★△△ 0.253±0.019**★★△△ 0.247±0.016**★★△△ 温针＋抑制剂组Warm needle combined with inhibitor group 0.445±0.044**★△△ 0.452±0.047**★★△△ 0.404±0.030**△△ F 50.328 62.998 57.252 P <0.001 <0.001 <0.001

注：与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，★P<0.05，★★P<0.01；与温针组比较，△△P<0.01。

Note：**P<0.01 compared with the normal group; ★P<0.05，★★P<0.01 compared with the model group; △△P<0.01 compared with the warm needle group.

4 讨论

中医将抑郁症归于神志病范畴，认为其临床表现与“郁证”“脏躁”等相似。根据文献梳理，可知体内阳气不足和抑郁症的发病有一定关联性。《景岳全书》云：“真阳不足者，必神疲气怯。”一身之阳根于肾，肾阳不足影响着体内阳气的盛衰，亦是抑郁症发病的关键所在[

6-10]。“肾脑相济”理论认为“脑为髓海”“肾主骨生髓”，肾精足可上承至脑，以充髓海、养脑神，肾与脑相互作用、互为影响，为神明志安奠定基石；若肾精虚亏无法上济于脑，则“肾脑失济”，是神志病的主要病机[11]。肾阳是“肾脑相济”发挥其生理功能作用的关键，一方面，独阴不生，肾阴、肾精依赖肾阳之温养方可充盈有余，以供养脑神；另一方面，肾阳为督脉的运行提供动力，督脉将肾中精髓部分上充至脑，使脑神得养，以维持神志功能的正常运行，形成肾－督脉－脑－神系统[12-14]。肾－督脉－脑－神系统是在“肾脑相济”理论上拓展而来，并以此为基础提出温肾通督法治疗抑郁症。温肾通督以温肾通督、养脑安神立法，强调肾阳和督脉在抑郁症防治方面的重要地位。本课题组在针灸治疗情志病的过程中，选取“百会”“印堂”“命门”“腰阳关”对抑郁症大鼠模型进行温针干预，着重从温肾通督、益脑宁神治疗思路出发，调节脏腑机能，具有很好的治疗效果。中医认为肾主骨生髓，肾髓主要由脊髓、骨髓、脑髓3部分组成[15]，其中，脑髓的功能和西医的脑内神经元功能相符，肾髓不足所致的脑髓亏虚也与脑内神经元功能失常紧密相关[16]。换言之，肾功能正常与否能够影响脑区的功能变化。肾中精气旺盛，上通于脑则脑髓充盈、神机灵活；若肾气衰败，髓海失养，可引起一系列的精神情志变化。

译

cAMP是细胞内参与调节内源性物质代谢和生理功能的重要物质，是生命信息传递的第二信使。当一些神经细胞兴奋时，突触前神经末梢可释放促肾上腺皮质激素(ACTH)，ACTH可作用于突触后膜上相应的受体并激活腺苷酸环化酶(AC)，AC可催化三磷酸腺苷水解转化为cAMP，进而激活cAMP直接激活的交换蛋白，再激活下游的RAP1信号通路[

17-18]，活化下游环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)，磷酸化的CREB能够引起神经元兴奋、长期记忆，并促进海马神经细胞可塑性[19-23]。肾阳虚时，下丘脑－垂体－肾上腺轴受抑制，肾上腺功能减退，分泌的ACTH减少[24-25]，可抑制cAMP-RAP1-CREB信号通路传导，海马功能受到影响，导致抑郁症的发生发展。

译

本实验采用慢性不可预见性温和刺激结合氢化可的松造模，能够抑制大鼠食欲，降低体温，增加绝望感，伴随认知功能降低[

26]。温肾通督针法能够改善模型大鼠的行为学指标水平，加入ESI-09的抑制剂组和温针＋抑制剂组大鼠行为学指标水平较差。一方面，说明病证结合模型造模成功；另一方面，提示温肾通督针法能够改善模型大鼠的抑郁样行为，这种改善可能与cAMP-RAF1信号通路有一定联系。通过ELISA检测发现，模型组大鼠的5-HT、DA、NE、BDNF含量均低于正常水平，温肾通督针法可提高模型大鼠体内5-HT、DA、NE、BDNF含量。加入ESI-09的抑制剂组和温针＋抑制剂组大鼠的5-HT、DA、NE、BDNF含量均降低，说明ESI-09可通过抑制cAMP-RAF1信号通路以影响海马神经可塑性。进一步研究发现，模型组大鼠cAMP-RAF1信号通路相关蛋白表达下调，经温肾通督针法干预后温针组、温针＋抑制剂组此通路的蛋白表达水平均提高。综上所述，温肾通督针法可能通过上调cAMP-RAF1信号通路相关蛋白的表达，激活cAMP-RAP1下游信号通路，恢复海马功能，上调单胺类神经递质5-HT、DA、NE含量，从而改善大鼠抑郁样行为。

译

利益冲突

Conflicts of interest: None of the authors have any conflicts of interest associated with this study, and all of the authors have read and approved this manuscript.

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网址: 温肾通督针法对抑郁症肾阳虚证模型大鼠相关神经递质及cAMP－RAF1信号通路的影响 https://m.huajiangbk.com/newsview315915.html

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