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农杆菌介导的TFL1基因转化菊花的研究

花匠小妙招
2024-11-02 00:15

【摘要】： 菊花是原产我国的十大名花之一,由长期人工培育和天然种间杂交而来。菊花在叶、花型、瓣型上变化很大,色、香、姿、韵俱佳,与梅兰竹共称为“花卉四君子”,不仅为我国人民所喜爱,而且现已为世界各国广泛栽培。菊花品种繁多,我国多达3000多种,全世界7000多种,但大多数品种的自然花期较集中,其自然花期在一定程度上制约着菊花生产的发展,因此培育菊花的花期多样性具有十分重要的意义。TFL1基因属植物FT/TFLl(FLOWERING LOCUS T/TERMlNAL FLOWER l)基因家族,TFL1基因抑制花序分生组织向花分生组花织的转变,从而抑制开花使植物花期推后。本研究意在通过对菊花再生体系及农杆菌介导的遗传转化体系的研究,将TFL1基因导入到菊花中,以期获得花期推后的菊花材料,并为利用转基因技术改良菊花品种的更广泛运用打下基础。(1)菊花再生体系的建立及转化受体的筛选以翻银彩桂、广东黄、日本紫、丽金、橙黄莲、雪莲六个品种的外植体为试验材料,经组织培养获得无菌苗,再通过对6个菊花品种无菌苗幼叶再生的研究,获得了“广东黄”幼叶的高频再生体系,在MS+2.0 mg/ L BA+0.2 mg / L NAA的培养基中再生率高达92%。(2)建立了以“广东黄”幼叶为受体的转化体系取5 mm见方的广东黄无菌苗叶片,在OD600=0.5的农杆菌的MS0悬浮菌液中震荡浸染30 min,共培养3 d,在500 mg/ L Cef+500 mg/ L Carb的MS0液体培养基中脱菌1-2 h,延迟筛选3 d;在120 mg/ L Cef+15 mg/ L Kan的分化培养基中分化培养;待芽长至2 cm左右,切下接入1/2 MS+15 mg/ L Kan中生根。(3)转化植株的PCR检测和RT-PCR鉴定对转化植株一代苗和二代苗的DNA进行PCR扩增,得到了与阳性对照TFL1 ( 998 bp )目的基因相同的特异片段,筛选得到了5株阳性植株,初步鉴定了目的基因己经整合到菊花基因组中,总转化率为4.03%。分别对5株阳性苗的叶和茎尖的RNA进行RT-PCR鉴定,确定了外源基因TFL1在菊花体内转录表达了。(4)转化植株的田间鉴定通过对5株转基因植株园艺性状的田间观察,与对照相比,其开花期均推后7 d左右。

【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011

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