一种干花豆组培苗的培育方法.pdf
《一种干花豆组培苗的培育方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种干花豆组培苗的培育方法.pdf（8页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410275408.X (22)申请日 2014.06.19 A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人 广西壮族自治区中国科学院广西 植物研究所 地址 541006 广西壮族自治区桂林市雁山区 雁山街 85 号 (72)发明人 刘金磊 苏涛 杨子明 颜小捷 王磊 李典鹏 (74)专利代理机构 桂林市持衡专利商标事务所 有限公司 45107 代理人 唐智芳 CN 103688855 A,2014.04.02, CN 103283599 A,2013.09.11, CN 103503771 A,2014.01.15, CN。
2、 1187933 A,1998.07.22, 韦莹等. “牛大力离体培养与植株再生条件的 优化” .湖北农业科学 .2012, 第 51 卷 ( 第 23 期 ), (54) 发明名称 一种干花豆组培苗的培育方法 (57) 摘要 本发明公开了一种干花豆组培苗的培育方 法， 包括以下步骤 ： 1) 取干花豆种子经消毒处理 后接种于无菌芽苗培养基中， 光照培养， 得到萌发 的干花豆幼苗 ； 2) 选取生长健壮的干花豆幼苗， 分切成带腋芽单节茎段 ； 3) 将分切得到的带腋芽 单节茎段接种于诱导培养基中， 光照培养， 直至长 出淡黄色或乳白色愈伤组织 ； 4) 将所得愈伤组织 切成块状， 接种于生芽。
3、培养基中， 光照培养， 得到 干花豆丛生苗 ； 5) 将所得干花豆丛生苗分株， 移 植于生根培养基中， 光照培养， 得到干花豆生根 苗。 本发明采用合理的培养基， 使培育得到的组培 苗生根率高 ； 整个方法简单易操作， 可实现大批 量生产， 培育得到的干花豆组培苗无菌无毒， 经炼 苗移栽后的成活率高。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 杜玉娟 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 104012413 B 2016.06.08 CN 104012413 B 1.一种干花豆组培苗的培育方法， 其特征在于： 包括以下步骤：。
4、 1)取干花豆种子经消毒处理后接种于无菌芽苗培养基中， 光照培养， 得到萌发的干花 豆幼苗； 其中， 在培养过程中， 每57天更换一次无菌芽苗培养基； 所述的无菌芽苗培养基 配方为： 1/2MS+GA3 1.02.0mg/L+蔗糖2535g/L+NAA 13mg/L+琼脂48g/L； 2)选取生长健壮的干花豆幼苗， 分切成带腋芽单节茎段； 3)将分切得到的带腋芽单节茎段接种于诱导培养基中， 光照培养， 直至长出淡黄色或 乳白色愈伤组织； 所述的诱导培养基配方为： MS 500800mg/L+2,4-D 2.04.0mg/L+椰子 汁200500mg/L+活性炭5001000mg/L+琼脂500。
5、600mg/L， pH 5.86.2； 4)将所得愈伤组织切成块状， 接种于生芽培养基中， 光照培养， 得到干花豆丛生苗； 所 述的生芽培养基配方为： 1/2MS+6-BA 210mg/L； 5)将所得干花豆丛生苗分株， 移植于生根培养基中， 光照培养， 得到干花豆生根苗； 所 述的生根培养基配方为： 1/4MS+IBA 48mg/L+NAA 12mg/L； 上述各步骤中， 所述光照培养的培养条件为： 温度： 昼/夜272/172； 光照周期： 昼/夜1620h/84h； 光照强度15002000lx。 2.根据权利要求1所述的干花豆组培苗的培育方法， 其特征在于： 步骤1)中， 所述的无 菌。
6、芽苗培养基配方为： 1/2MS+GA31.5mg/L+蔗糖30g/L+NAA 2mg/L+琼脂5g/L。 3.根据权利要求1所述的干花豆组培苗的培育方法， 其特征在于： 步骤3)中， 所述的诱 导培养基配方为： MS 600800mg/L+2,4-D 3.0mg/L+椰子汁300400mg/L+活性炭700 900mg/L+琼脂500600mg/L， pH5.86.2。 4.根据权利要求1所述的干花豆组培苗的培育方法， 其特征在于： 步骤4)中， 所述的生 芽培养基配方为： 1/2MS+6-BA 48mg/L。 5.根据权利要求1所述的干花豆组培苗的培育方法， 其特征在于： 步骤5)中， 所述。
7、的生 根培养基配方为： 1/4MS+IBA 56mg/L+NAA 11.5mg/L。 6.根据权利要求1所述的干花豆组培苗的培育方法， 其特征在于： 所述光照培养的培养 条件为： 温度： 昼/夜272/172； 光照周期： 昼/夜18h/6h； 光照强度15002000lx。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 104012413 B 2 一种干花豆组培苗的培育方法 技术领域 0001 本发明涉及植物的组织培养技术， 具体涉及一种干花豆组培苗的培育方法。 背景技术 0002 干花豆(Fordia cauliflora Hemsl)为豆科蝶形花亚科干花豆属植物， 又名野京 豆、 水罗伞、 。
8、土甘草、 虾须草、 玉郎伞等。 干花豆的花期在59月， 果期在611月， 其荚果呈 棍棒状， 扁平， 长710cm， 宽22.5cm， 革质， 顶端截形， 具尖喙， 基部渐狭， 被平伏柔毛， 后 渐秃净， 有种子12粒； 种子呈圆形， 扁平， 宽约1cm， 棕褐色， 光滑， 种阜膜质， 包于珠柄。 干 花豆性辛、 平， 味甘、 微酸， 无毒， 具有散淤消肿、 止痛宁神、 润肺化痰等功效。 在广西壮、 瑶族 中用于风湿骨痛、 跌打损伤、 骨折、 小儿痴呆、 小儿疳积、 肌痿症、 体虚及产妇身体复元等症。 现代药理学研究表明， 干花豆具有抗炎、 抗氧化、 抗衰老、 提高记忆力等作用。 0003 目。
9、前， 干花豆的采集主要以野生为主， 随着人们的采伐， 近些年来干花豆的野外生 长面积逐步缩小， 在很大程度上限制了干花豆作为药用植物的利用。 现有干花豆的人工栽 培方式主要是采用来自于野生植株驯化所产生的种子进行播种， 首先， 这种方式存在种子 不易萌发、 幼苗易受病虫害等问题； 其次， 这种方式难以大批量生产， 无法满足现代规模化 种植的需求。 发明内容 0004 本发明要解决的技术问题是提供一种干花豆组培苗的培育方法。 该方法简单易操 作， 可实现大批量生产， 培育得到的干花豆组培苗无菌无毒， 移栽后成活率高。 0005 本发明所述的干花豆组培苗的培育方法， 包括以下步骤： 0006 1)。
10、取干花豆种子经消毒处理后接种于无菌芽苗培养基中， 光照培养， 得到萌发的 干花豆幼苗； 其中， 在培养过程中， 每57天更换一次无菌芽苗培养基； 所述的无菌芽苗培 养基配方为： 1/2MS+GA3 1.02.0mg/L+蔗糖2535g/L+NAA 13mg/L+琼脂48g/L； 0007 2)选取生长健壮的干花豆幼苗， 分切成带腋芽单节茎段； 0008 3)将分切得到的带腋芽单节茎段接种于诱导培养基中， 光照培养， 直至长出淡黄 色或乳白色愈伤组织； 所述的诱导培养基配方为： MS 500800mg/L+2,4-D 2.04.0mg/L+ 椰子汁200500mg/L+活性炭5001000mg/。
11、L+琼脂500600mg/L， pH 5.86.2； 0009 4)将所得愈伤组织切成块状， 接种于生芽培养基中， 光照培养， 得到干花豆丛生 苗； 所述的生芽培养基配方为： 1/2MS+6-BA 210mg/L； 0010 5)将所得干花豆丛生苗分株， 移植于生根培养基中， 光照培养， 得到干花豆生根 苗； 所述的生根培养基配方为： 1/4MS+IBA 48mg/L+NAA 12mg/L； 0011 上述各步骤中， 所述光照培养的培养条件为： 温度： 昼/夜272/172； 光照周 期： 昼/夜1620h/84h； 光照强度15002000lx。 0012 上述所述的培育方法中， 0013 。
12、步骤1)中， 优选是选取色泽鲜亮、 充实、 饱满的干花豆种子， 该所述的干花豆种子 说 明 书 1/5 页 3 CN 104012413 B 3 可以是野生植株的种子， 也可以是经野生植株驯化所得植株所产生的种子， 优选是采用人 工授粉发育成熟的干花豆种子， 具体地， 可以选取生长健壮的5年生以上的干花豆母株， 在 开花时进行人工授粉， 在1012月份， 选取人工授粉发育至基本成熟但是还未开裂的干花 豆荚果种子。 采用人工授粉发育成熟的干花豆种子可以进一步提高种子授粉率， 从而有利 于后续干花豆幼苗的萌发率。 该步骤中， 所述的无菌芽苗培养基配方优选为： 1/2MS+GA3 1.5mg/L+蔗。
13、糖30g/L+NAA 2mg/L+琼脂5g/L。 该步骤中， 通常是对干花豆种子进行常规的消 毒处理， 具体的消毒处理可按下述方法进行： 取干花豆种子流水冲洗2030min， 在超净工 作台上用7075(体积)的乙醇浸泡30s， 无菌水清洗35次， 在0.10.3(质量)的升汞 中浸泡810min后， 取出， 用蒸馏水冲洗3次。 申请人发现， 在该步骤中的光照培养过程中， 通过每57天更换一次无菌芽苗培养基的操作不仅可以使干花豆幼苗更快、 更好地萌发， 而且萌发得到长势更为健壮的干花豆幼苗。 0014 步骤2)中， 选取生长健壮的干花豆幼苗， 按现有常规方法将其分切成带腋芽单节 茎段， 具体按。
14、以下方法进行： 选取生长健壮的干花豆幼苗， 切取带叶片茎段置于烧杯中， 用 纱布封口后流水冲洗23h， 用7075(体积)的乙醇浸泡2030s， 然后用0.10.3(质 量)的升汞溶液灭菌58min， 取出， 用无菌水冲洗5次， 得到外植体； 然后用无菌滤纸吸干外 植体表面的水分， 在无菌条件下用剪刀将外植体的所有叶片剪下(保留少许叶柄)， 再用小 刀切割干花豆茎段， 使每个茎段含两个对生的腋芽(长约为11.5cm)， 即得到带腋芽单节 茎段。 0015 步骤3)中， 所述的诱导培养基配方优选为： MS 600800mg/L+2,4-D3.0mg/L+椰子 汁300400mg/L+活性炭700。
15、900mg/L+琼脂500600mg/L， pH 5.86.2， 更优选为MS 600mg/L+2,4-D 3.0mg/L+椰子汁300mg/L+活性炭700mg/L+琼脂550mg/L， pH 6.0。 0016 步骤4)中， 所述的生芽培养基配方优选为： 1/2MS+6-BA 48mg/L， 更优选为1/2MS +6-BA 6mg/L。 0017 步骤5)中， 所述的生根培养基配方优选为： 1/4MS+IBA 56mg/L+NAA 11.5mg/ L， 更优选为1/4MS+IBA 6mg/L+NAA 1.5mg/L。 0018 上述培育方法中所述光照培养的培养条件优选为： 温度： 昼/夜2。
16、72/172； 光 照周期： 昼/夜18h/6h； 光照强度15002000lx。 光照强度优选为18002000lx。 0019 在上述限定的光照培养条件下， 干花豆种子在无菌芽苗培养基中光照培养得到萌 发的干花豆幼苗所需的时间约为2025天； 带腋芽单节茎段在诱导培养基中光照培养直至 长出淡黄色或乳白色愈伤组织所需的时间约为1015天； 愈伤组织在生芽培养基中光照培 养得到干花豆丛生苗所需的时间约为2030天； 干花豆丛生苗在生根培养基中光照培养得 到干花豆生根苗所需的时间约为820天， 判定得到干花豆生根苗的基准与现有技术中其 它植株进行生根培养时得到生根苗的要求相同， 具体可以是当丛生。
17、苗长出12cm的完整根 系时即认定得到干花豆生根苗了。 0020 与现有技术相比， 本发明采用合理的培养基， 使培育得到的组培苗生根率高， 克服 了传统方法存在的种子不易萌发、 幼苗易受病虫害等不足； 整个方法简单易操作， 可实现大 批量生产， 培育得到的干花豆组培苗无菌无毒， 经炼苗移栽后的成活率高。 附图说明 说 明 书 2/5 页 4 CN 104012413 B 4 0021 图1为实施例1中所得的干花豆丛生苗照片。 具体实施方式 0022 下面以具体实施例对本发明作进一步说明， 但本发明并不局限于这些实施例。 0023 实施例1 0024 1)在4月份， 选取发育成熟的、 色泽鲜亮、。
18、 充实、 饱满的干花豆种子流水冲洗20min， 在超净工作台上用70(体积)的乙醇浸泡20s， 无菌水清洗3次， 在浓度为0.3(质量)的升 汞中浸泡8min后， 取出， 用蒸馏水冲洗3次后接种到无菌芽苗培养基上， 每个50ml三角瓶中5 8粒种子， 光照培养23d后， 得到萌发的干花豆幼苗； 其中， 所述无菌芽苗培养基配方为： 1/ 2MS+GA3 1.5mg/L+蔗糖30g/L+NAA 2mg/L+琼脂5g/L， pH为5.8； 光照培养条件为： 光照强度 1500lx， 光照时间18h/d， 温度为2628； 黑暗处理6h/d， 温度为1618， 每6天更换一次 培养基； 0025 2)。
19、选取无病、 生长健壮的干花豆幼苗， 切取带叶片茎段置于烧杯中， 用纱布封口后 流水冲洗2h， 用70(体积)的乙醇浸泡20s， 然后用0.1(质量)升汞溶液灭菌5min后， 立即 用无菌水冲洗5次， 得到外植体； 用无菌滤纸吸干外植体表面的水分， 在无菌条件下用剪刀 将外植体的所有叶片剪下， 保留少许叶柄， 再用小刀切割干花豆茎段， 使每个茎段含两个对 生的腋芽,长1cm， 即得到分切好的带腋芽单节茎段； 0026 3)将分切好的带腋芽单节茎段迅速接种于诱导培养基中， 光照培养10d， 得到淡黄 色或乳白色愈伤组织； 其中， 所述的诱导培养基配方为： MS 500mg/L+2,4-D 3.0m。
20、g/L+椰子 汁200mg/L+活性炭500mg/L+琼脂500mg/L； 光照培养条件为： 光照强度1500lx， 光照时间 18h/d， 温度为2628； 黑暗处理6h/d， 温度为1618； 0027 4)将所得的淡黄色或乳白色愈伤组织切成黄豆大小块状， 接种于生芽培养基中， 光照培养28d， 得到干花豆丛生苗， 如图1所示； 所述的生芽培养基配方为： 1/2MS+6-BA 2mg/ L； 0028 5)将所得干花豆丛生苗分株， 移植于生根培养基中， 光照培养20d， 得到干花豆生 根苗； 所述的生根培养基配方为： 1/4MS+IBA 4mg/L+NAA 1mg/L； 光照培养条件为： 。
21、光照强度 2000lx， 光照时间16h/d， 温度为2628； 黑暗处理8h/d， 温度为1618； 0029 6)将所得干花豆生根苗按常规方法进行炼苗， 即得到干花豆组培苗。 0030 实施例2 0031 1)选取生长健壮的5年生以上的干花豆母株， 在开花时进行人工授粉， 在1012月 份， 采收人工授粉发育至基本成熟但是还未开裂的干花豆荚果种子， 按常规方法保存， 备 用； 0032 2)在来年的4月份， 选取色泽鲜亮、 充实、 饱满的干花豆种子流水冲洗20min， 在超 净工作台上用70(体积)的乙醇浸泡20s， 无菌水清洗3次， 在浓度为0.1(质量)的升汞中 浸泡10min后， 取。
22、出， 用蒸馏水冲洗3次后接种到无菌芽苗培养基上， 每个50ml三角瓶中10粒 种子， 光照培养25d后， 得到萌发的干花豆幼苗； 其中， 所述无菌芽苗培养基配方为： 1/2MS+ GA3 2.0mg/L+蔗糖35g/L+NAA 1mg/L+琼脂8g/L， pH为6.2； 光照培养条件为： 光照强度 1800lx， 光照时间18h/d， 温度为2628； 黑暗处理6h/d， 温度为1618， 每7天更换一次 培养基； 说 明 书 3/5 页 5 CN 104012413 B 5 0033 3)选取无病、 生长健壮的干花豆幼苗， 切取带叶片茎段置于烧杯中， 用纱布封口后 流水冲洗2h， 用70(体。
23、积)的乙醇浸泡20s， 然后用0.1(质量)升汞溶液灭菌5min后， 立即 用无菌水冲洗5次， 得到外植体； 用无菌滤纸吸干外植体表面的水分， 在无菌条件下用剪刀 将外植体的所有叶片剪下， 保留少许叶柄， 再用小刀切割干花豆茎段， 使每个茎段含两个对 生的腋芽,长1.5cm， 即得到分切好的带腋芽单节茎段； 0034 4)将分切好的带腋芽单节茎段迅速接种于诱导培养基中， 光照培养15d， 得到淡黄 色或乳白色愈伤组织； 其中， 所述的诱导培养基配方为： MS 800mg/L+2,4-D 3.0mg/L+椰子 汁500mg/L+活性炭1000mg/L+琼脂600mg/L； 光照培养条件为： 光照。
24、强度1800lx， 光照时间 18h/d， 温度为2628； 黑暗处理6h/d， 温度为1618； 0035 5)将所得的淡黄色或乳白色愈伤组织切成黄豆大小块状， 接种于生芽培养基中， 光照培养20d， 得到干花豆丛生苗； 所述的生芽培养基配方为： 1/2MS+6-BA 10mg/L； 0036 6)将所得干花豆丛生苗分株， 移植于生根培养基中， 光照培养15d， 得到干花豆生 根苗； 所述的生根培养基配方为： 1/4MS+IBA 8mg/L+NAA 2mg/L； 光照培养条件为： 光照强度 2000lx， 光照时间16h/d， 温度为28； 黑暗处理8h/d， 温度为16； 0037 7)将。
25、所得干花豆生根苗按常规方法进行炼苗， 即得到干花豆组培苗。 0038 实施例3 0039 1)在4月份， 选取发育成熟的、 色泽鲜亮、 充实、 饱满的干花豆种子流水冲洗30min， 在超净工作台上用75(体积)的乙醇浸泡20s， 无菌水清洗3次， 在浓度为0.1(质量)的升 汞中浸泡10min后， 取出， 用蒸馏水冲洗3次后接种到无菌芽苗培养基上， 每个50ml三角瓶中 8粒种子， 光照培养20d后， 得到萌发的干花豆幼苗； 其中， 所述无菌芽苗培养基配方为： 1/ 2MS+GA3 1.0mg/L+蔗糖25g/L+NAA 3mg/L+琼脂4g/L， pH为6.0； 光照培养条件为： 光照强度 。
26、1800lx， 光照时间20h/d， 温度为2527； 黑暗处理4h/d， 温度为1719， 每5天更换一次 培养基； 0040 2)选取无病、 生长健壮的干花豆幼苗， 切取带叶片茎段置于烧杯中， 用纱布封口后 流水冲洗2h， 用70(体积)的乙醇浸泡20s， 然后用0.1(质量)升汞溶液灭菌6min后， 立即 用无菌水冲洗5次， 得到外植体； 用无菌滤纸吸干外植体表面的水分， 在无菌条件下用剪刀 将外植体的所有叶片剪下， 保留少许叶柄， 再用小刀切割干花豆茎段， 使每个茎段含两个对 生的腋芽,长1cm， 即得到分切好的带腋芽单节茎段； 0041 3)将分切好的带腋芽单节茎段迅速接种于诱导培养。
27、基中， 光照培养12d， 得到淡黄 色或乳白色愈伤组织； 其中， 所述的诱导培养基配方为： MS 700mg/L+2,4-D 2.0mg/L+椰子 汁400mg/L+活性炭800mg/L+琼脂550mg/L； 光照培养条件为： 光照强度2000lx， 光照时间 18h/d， 温度为2729； 黑暗处理6h/d， 温度为1618； 0042 4)将所得的淡黄色或乳白色愈伤组织切成黄豆大小块状， 接种于生芽培养基中， 光照培养20d， 得到干花豆丛生苗； 所述的生芽培养基配方为： 1/2MS+6-BA 6mg/L； 0043 5)将所得干花豆丛生苗分株， 移植于生根培养基中， 光照培养10d， 得。
28、到干花豆生 根苗； 所述的生根培养基配方为： 1/4MS+IBA 6mg/L+NAA 1.5mg/L； 光照培养条件为： 光照强 度1800lx， 光照时间16h/d， 温度为26； 黑暗处理8h/d， 温度为18； 0044 6)将所得干花豆生根苗按常规方法进行炼苗， 即得到干花豆组培苗。 0045 田间实验： 说 明 书 4/5 页 6 CN 104012413 B 6 0046 2013年， 申请人按本发明实施例1的方法进行培育， 将得到的干花豆组培苗直接移 栽于实验田中， 之后按常规管理方式进行管理， 移栽成活率 95(移植组培干花豆种苗成 活株数/干花豆组培苗的总移植株数100)。 说 明 书 5/5 页 7 CN 104012413 B 7 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 8 CN 104012413 B 8 。
相关知识
一种减少八仙花组培苗气生根的方法
一种金钱松试管苗培育方法.pdf
一种团花组培苗的种植方法与流程
植物组培技术、花卉组培工艺、植物花卉苗木组培方法
球根花卉组培苗容器内成球的培养方法.pdf
组培苗的养护和炼苗（组培室设计净化建设）
一种新优花卉红冠桉组培快繁方法与流程
花卉的组培技术应用
菊花苗组培脱毒与快速繁殖的方法.pdf
花生组培苗高效嫁接技术
网址: 一种干花豆组培苗的培育方法.pdf https://m.huajiangbk.com/newsview541497.html
| 上一篇: 八仙花组培苗促成栽培技术 |
下一篇: 西南桦组培苗培育的轻基质筛选 |
