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第十二章植物脱毒技术.ppt

花匠小妙招
2024-11-18 15:51

热处理时，最初几天空气温度应逐步增高，直到达到要求为止。若钝化病毒所需要的连续高温处理会伤害寄主组织，则应当试验高低温交替的效果。在热处理期间应当保持适当的湿度和光照。而且要对植物进行修剪，以增加植物忍受热处理的能力。热处理的优缺点优点: 方法简单，效果明显。缺点: 1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失 3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。和单独采用热疗法相比，茎尖培养具有更广泛的适用性。很多不能由单独的热处理消除的病毒，可以通过茎尖培养和热处理相结合，或单独的茎尖培养而消除。因而，茎尖培养现在已经成为消除病毒的一个很常用的手段。 12、4通过茎尖培养消除病菌 1）原理及依据病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争 2）操作程序外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。 12、4、1 外植体名称在应用组织培养方法以获得无病菌植物时，所用的所用的外植体可以是茎尖，也可以是茎的顶端分生组织。在这里，顶端分生组织是指茎的最幼龄叶原基上方的一部分，最大直径约为100um，最大长度约为250um。茎尖是由顶端分生组织及其下方的1-3个叶原基一起构成的（如图13、2），虽然通过顶端分生组织培养消除病毒的机会较高，但在大多数已发表的的工作中，无毒植物都市通过茎尖培养得到的。 12、4、2剥取茎尖的方法解剖镜（体视显微镜），解剖针，解剖刀。为了防止茎尖变干，要在衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行解剖。茎尖外植体要用75％酒精浸蘸一下或0.1％的次氯酸钠消毒（10分钟）。在剖取茎尖时，要把茎芽置于解剖镜下，一手用一把细镊子将其按住，另一手用解剖针将叶片和叶原基剥掉。当形似一个透明闪亮的半球形顶端分生组织暴露出来之后，用一个锋利的长柄刀片将分生组织切下来，上面可以带有叶原基，也可不带，然后用同一工具接种到培养基上。对于难以生根的要嫁接到健康的砧木上。注意，不要太大，以免带有较老的组织。 1、茎尖脱毒方法 1）取样与消毒可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种。消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。酒精擦拭手外植体消毒浸泡5min 器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿 2、茎尖剥离和接种将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上—器械固定—解剖镜下剥去幼叶—切下带1-2个叶原基的生长点（0.3-0.5mm）—切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。酒精擦拭旋转灼烧显微镜下获取茎尖接种盖好瓶塞脱毒马铃薯试管苗 3．培养 25+2℃ ，1500-5000LX，10-16h 一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。4．生根诱导诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生根培养基继续培养1-2个月可生根。 12、4、3在茎尖中影响脱毒效果的因素（一）培养基 MS培养基是常用的较好的适于茎尖培养的培养基之一。下表是几种常用于茎尖培养的培养基。虽然较大的茎尖外植体（500μm）或更长在不含生长调节剂的培养基中也能产生一些完整的植株，但一般来说，含有少量（0.1－0.5mg/L的生长素或细胞分裂素或二者皆有常常是有利的。在各种不同的生长素中，应当避免使用2，4－D，因为它通常能诱导外植体形成愈伤组织，广泛使用的生长素是NAA和IAA，其中NAA由于比较稳定，效果更好。（二）外植体大小在最适培养条件下，外植体的大小可以决定茎尖的存活率。外植体越大，产生再生植株的机会也就越多，在木薯中，只有200 μm长的外植体能够形成完整的植株，再小的茎尖或是形成愈伤组织，或是只能长根。小外植体可能也不利于茎的生根。然而，不应当离开脱毒效率（它与外植体的大小呈负相关）单独看待外植体的存活率，因此，外植体应小到足以能根除病毒，大到足以能发育成一个完整的植株。用于脱毒的适宜茎