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不同类型水仙亲缘关系的分子标记研究

花匠小妙招
2024-11-23 16:14

不同类型水仙亲缘关系的分子标记研究

【摘要】： 本实验运用RAPD、ISSR对58份不同类型、不同来源的水仙材料进行亲缘关系研究，并将RAPD标记中法国水仙型的特异标记转化为重复性和稳定性好的SCAR标记，用于该类型材料的鉴定等研究工作中。研究结果如下： 1．采用2％CTAB微量法提取水仙DNA，结果显示所得DNA浓度高于其它植物采用此方法甚至大量法得到的DNA浓度。表明水仙叶片组织柔嫩，纤维素等物质含量少，易获得高浓度DNA。水仙叶片中内含物对DNA提取影响很小，2％CTAB微量法不必添加其它辅助试剂即可获得高质量DNA。 2．对水仙RAPD反应体系中各组分，均设4个水平进行正交分析，得到的6个最佳反应体系表明影响RAPD扩增效果的并不是某个组分的特定浓度，而在于RAPD反应体系中各组分的浓度组合。由于RAPD使用的是随机引物，各引物碱基序列相差较远，因而在体系中与各组分的结合程度也不一致，形成各引物相异的最适反应体系。 3．RAPD分类结果总体上与英国皇家园艺学会分类系统相符。58份材料被划分为10个类群。丁香水仙型、大杯状副冠型、喇叭状副冠型、重瓣型各自结合成一类，其中丁香水仙型是进化中较原始类型，另外3者亲缘关系相近，平均遗传相似系数0.610。花色的改变显示了较高水平的变异。地理位置的影响在法国水仙型材料中产生不同程度的变异，相近的地理位置变异程度相近。法国水仙型与丁香水仙型、大杯状副冠型、喇叭状副冠型重瓣型亲缘关系较远，平均相似系数0.493，它们在水仙属中分属不同的种。野生型与以上各类型亲缘关系最远，平均相似系数0.229，为水仙属中另一种。且法国水仙型与野生型在树状图顶部聚类，可能是进化较晚的类型。水仙花器官的进化过程由简单到复杂，具体表现为副冠由小型、大型至瓣化发展。 4．对水仙ISSR反应体系中各组分各设4个水平进行正交分析，结果表明，ISSR扩增效果也由体系中各组分的浓度组合决定。4碱基重复引物尤其是(AGTG)_4和(GACA)_4扩增效率高。ISSR扩增程序中在扩增初始阶段采用较高退火温度，经循环后逐渐降低退火温度，有利于扩增结果清晰度和多态性的提高。 5．ISSR与RAPD分类结果基本一致。由于引物数量较少，ISSR分类结果较为粗略，但6个ISSR引物就可得出与RAPD 14个引物相近的结果，ISSR的高效性与多态性显得尤为突出。 6．在RAPD反应中，引物S488在17份法国水仙型的材料中扩增出特异带S488-631，测序后将该条带转化为SCAR标记，大幅度提高该标记的特异性和稳定性，更方便快捷地应用于法国水仙型的鉴定。

【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003

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