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基于MSAP的牡丹复色花DNA甲基化分析（72页）

花匠小妙招
2024-11-24 03:39

符号说明 s:Second, 秒 μg:Microgram, 微克 μL:Microliter,微升 g :Gram, 克 h:Hour, 小时 Kan:Kanamycin, 卡那霉素 L:Liter, 升 min:Minute, 分钟 mL:Milliliter, 毫升 Amp:Ampicillin, 氨苄青霉素 bp :Basepair, 碱基对 ppm partsper million ：，百万分比浓度 cDNA:Complementary deoxyribonucleicacid, 互补脱氧核糖核酸 DNA:Deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸 EDTA:Ethylenediaminetetraacetic acid, 乙二胺四乙酸 mRNA:Messengerribonucleic acid, 信使核糖核酸 PCR:Polymerasechainreaction, 聚合酶链式反应 RNA:Ribonucleicacid, 核糖核酸 xg:Revolutionsper, 转速 CTAB:Hexadecyltrimethyl ammoniumBromide, 十六烷基三甲基溴化铵 ddH2O:DoubleDistilledWater, 双蒸水 DNA:DeoxyribonucleicAcid, 脱氧核糖核酸 EDTA:EthyleneDiamineTetraaceticAcid, 乙二胺四乙酸 PAGE:PolyacrylamideGelElectrophoresis, 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PVP:Polyvinylpyrrolidone, 聚乙烯吡咯烷酮 TEMED:N,N,N’,N’-tetramethyl ethylenediamine,N,N,N’,N’-四甲基乙二胺 qRT-PCR:QuantitativeReal-TimePolymerase Chain Reaction, 实时定量聚合酶链式反应目录中文摘要 Ⅰ 英文摘要Ⅲ 1 前言1 1.1植物花色与花青苷1 1.1.1影响花色形成的相关因素1 1.1.2 花青苷的生物合成2 1.2 植物DNA 甲基化研究进展3 1.2.1DNA 甲基化与表观遗传学4 1.2.2DNA 甲基化的发生机制4 1.2.3植物基因组DNA 甲基化水平5 1.2.4 植物基因组DNA 甲基化模式6 1.3DNA 甲基化对花青苷合成调控的影响6 1.4 甲基化敏感扩增多态性技术7 1.5研究目的和意义8 2 材料与方法8 2.1植物材料8 2.2 主要试剂和相关试剂配制9 2.2.1主要试剂9 2.2.2 相关试剂配制10 2.3主要仪器12 2.4 实验方法12 2.4.1 基因组DNA 的提取12 2.4.2MSAP 反应体系的优化14 限制性酶切体系14 连接反应体系15 预扩增反应体系16 选择性扩增体系与引物筛选16 聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染与条带统计16 2.4.3 甲基化差异片段的回收、克隆与测序18 回收18 克隆19 序列比对20 2.4.4 甲基化差异基因的表达分析20 植物总RNA 的提取和检测20 反转录合成cDNA21 PsbHLH1基因实时荧光定量PCR21 3 结果与分析22 3.1DNA 提取方法的确定22 3.1.1 琼脂糖凝胶电泳检测22 3.1.2 核酸分析仪检测 23 3.2MSAP 体系的优化23 3.2.1 酶切时间的优化24 3.2.2 酶连产物稀释倍数的优化24 3.2.3 选择性扩增引物的筛选25 3.3 ‘太阳’和 ‘岛锦’牡丹花瓣DNA 甲基化的MSAP 分析26 3.3.1DNA 甲基化水平26 3.3.2DNA 甲基化模式29 3.4 岛锦’牡丹红、粉色花瓣DNA 甲基化的MSAP 分析31 3.4.1DNA 甲基化水平31 3.4.2DNA 甲基化模式34 3.5 甲基化差异片段的回收、测序及表达分析35 3.5.1 甲基化差异片段的回收35 3.5.2 测序及序列分析36 3.5.3PsbHLH1基因在 ‘岛锦’牡丹红、粉色花瓣的表达分析37 ‘岛锦’牡丹花瓣RNA 提取质量检测37 PsbHLH1基因的表达分析38 4讨论39 4.1MSAP 技术体系的优化39