玉簪组织培养及试管苗内生菌污染控制研究
玉簪组织培养及试管苗内生菌污染控制研究
试验以玉簪“法兰西”品种的顶芽作为材料,研究在不同种类、不同浓度比例、不同培养条件下外源激素及栽培基质对玉簪不定芽的初代诱导、继代增殖、壮苗生根和炼苗移栽的影响,筛选出各阶段的最适宜配方。同时对玉簪的内生菌污染现象进行研究分析,通过对内生菌的分离鉴定和药敏试验,筛选出有效降低内生菌污染的抗生素种类及配方。主要研究结果如下：1.玉簪组织培养体系的建立芽诱导培养中,外植体的最佳选材部位是顶芽,诱导率达62%,且污染率较低；用0.1%升汞溶液进行外植体消毒处理,最适宜的灭菌时间为16min;初代诱导培养的最适宜培养基配方是MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L。继代芽增殖培养中,筛选出的培养基配方为MS+KT0.5mg/L+6-BA 1.0mg/L+NAA0.2mg/L,增殖系数达4.8。比较三种激素的F值可判断6-BA是影响不定芽继代增殖培养的主要因子,对不定芽增殖影响的程度依次为6-BAKTNAA。玉簪不定芽接种以2-3个芽丛,培养基的pH值调为6.0,每天光照时间12h,光照强度20001x,继代周期40d,继代次数不超过15次,增殖效果最好。优化培养设计方案时,以白糖替代蔗糖,以自来水替代蒸馏水,可降低试验成本,简化试验流程。壮苗生根培养中,筛选出适宜的培养基配方为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+AC200mg/L。玉簪试管苗炼苗移栽,适宜的炼苗时间为智能温室打开瓶盖2d后,移栽至草炭：珍珠岩=3：1的栽培基质中,成活率最高98.47%,且长势良好。2.玉簪试管苗内生菌污染控制研究在内生菌分离鉴定与药敏试验中,使用VITEK-2-Compact15全自动微生物鉴定系统鉴定本试验中玉簪试管苗污染的菌种为克氏库克菌,可信度99%。通过药敏试验可知,该菌对链霉素和林可霉素有不同程度的耐药性,而庆大霉素、阿莫西林、四环素等13种抗菌药物对克氏库克菌的滋生抑制效果较好。添加抗生素降低玉簪试管苗污染试验,将污染的试管苗分别浸泡在100mg/L青霉素和头孢唑啉溶液30min,抗菌率分别为46.2%、49.62%。培养基中添加400mg/L青霉素,抗菌率可达73.33%,30d后生根率高达98.6%,苗长势健壮；添加800mg/L头孢唑啉,抗菌率最高为76.67%,30d后生根率97.8%,苗长势良好,未作处理的对照组抗菌率为0,苗叶片枯黄、萎蔫,生长缓慢。
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