蓝莓枝干病害病原真菌的快速检测
蓝莓枝干病害病原真菌的快速检测
【摘要】：蓝莓(Vaccnium uliginosum L.),又名笃斯越橘,在全世界范围内广泛栽培,我国自1981年引入蓝莓栽培品种。蓝莓枝条枯萎病和溃疡病是蓝莓上最重要的病害,是蓝莓的栽培生产过程中,导致蓝莓植株死亡率最高和经济损失最严重的病害,在许多地区成为蓝莓生产的制约因子。目前全世界已报道的引起蓝莓枝枯病和溃疡病的病原真菌有40余种,我国仅有报道10余种,其中以葡萄座腔菌危害最为严重。本课题组对引起蓝莓枝枯病及溃疡病的病原真菌进行了广泛调查,发现10病原真菌,即:引起蓝莓枝枯病的Botryosphaeria longispermatia, Botryosphaeria pseudofabicerciana, Lasiodiplodia clavispora, Lasiodiplodia fujianensis, Lasiodiplodia henanica, Lasiodiplodia nanpingensis, Lasiodiplodia paraphysoides, Macrophomina vaccini;引起溃疡病的Neofusicoccum vaccinii, Neofusicoccum yunnana。本研究以引起中国蓝莓枝枯病及溃疡病的病原真菌为目标,根据病原菌的靶标基因特异区段在相近种之间的差异,以tef-1α(翻译延长因子)为靶序列并结合指示剂SYBR GreenⅠ荧光检测试剂,针对新发现的10种病原菌设计了LAMP检测技术体系,该方法仅需63℃恒温条件60 min便可通过肉眼观察确定病株是否带有靶标菌,经对其进行特异性、灵敏度评价以及田间回接样品进行检测,筛选出10组灵敏、准确、快速的LAMP引物组。该10组引物组成功对纯培养物和感病蓝莓植株进行了快速检测,可检测的病原菌浓度范围为1pg–10fg,可为田间蓝莓枝干真菌病害早期检验检疫及病原菌的快速鉴定提供理论依据和技术支持,对于及时有效地控制病害流行有重要意义。
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