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隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建

花匠小妙招
2024-09-13 13:36

隐花色素是植物向光反应的主要的光受体,介导蓝光／近紫外光调控的反应。在拟南芥中CRY2调节去黄化反应并控制开化时间。我们根据在GenBank中已经发表的拟南芥(NM_100320)、中国大白菜(AY176689)、油菜(AJ889779)CRY2基因的cDNA保守序列设计并合成同源引物。通过RT—PCR方法从“津田”芜菁(Brassica rapa L.subsp.rapa“Tsuda”)总RNA中扩增出CRY2基因的cDNA部分片段,

分子植物育种，0 8, 6卷， 6期， 18一 16页 20年第第第 12 l8 M o e u a ln e dn, 0 8 Vo ., ., 2 1 8 lc lr a t P Br e i g 2 0, 1 No 6 1 8— 6 6 1 1

新思路、新技术、新方法 No e hn ig& T c n lg v l ikn T e h oo y

隐花色素 C 2基因片段克隆及 R i RY NA植物表达载体的构建周波孙梅阎淑滑李玉花东北林业大学花卉生物工程研究所，哈尔滨， 0 0 10 4 5 通讯作者。y se@ 16CI lhh n 2 . T OI

摘要隐花色素是植物向光反应的主要的光受体，导蓝光/紫外光调控的反应。介近在拟南芥中 C 2 RY调节去黄化反应并控制开化时问。我们根据在 G n n eBak中已经发表的拟南芥 ( NM 030、国大白菜 102 )中 (V16 8)油菜( J879 C Y A 7 69、 A 897 ) R 2基因的 c NA保守序列设计并合成同源引物。通过 R—C D TP R方法从‘‘津田”菁(r s ar a .u s.aa Tu a, R芜 Ba i p sbprp“ sd’总 NA中扩增出 C Y sc a L ) R 2基因的 e A部分片段，用 gtw y DN采 a a e技术中的 B P反应将其克隆到 p N 2 1中。测序表明， DO R 2该片段与拟南芥具有 8%的同源性， 7与油菜和中国大 A菜的同源性达 9%以上。采用 gt y技术中的 L 7 ae wa R反应，以植物表达载体 p G WG2I H7 WI (为基础， )构建了由组成型启动子 3 S调控的 C 2基因的 ip NA植物表达载体。 5 RY hR i 关键词隐花色素 y 2基因， N,物表达载体 R Ai植

e DNA o i g a d Co sr c i n o Cl n n n n tu t fRNAiP a tE p e so co ft e o ln x r s i n Ve t ro h

Cr p o h o n R y t c r meGe eC Y2 Z o S n M e Ya h h a Li h a h u Bo u i nS u u Yu u I si t f o rBi e h l g, rh a tF r sr i e st, r i,1 0 4 n t u eo Fl we otc no o y No t e s o e t Un v r i Ha b n 0 0 t y

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C r so dn to,y se@ 16CI or p n ig uh rt h n . T e a h 2 OI

Abs r c Cr pt c o e i r u ffa i pe b ueu ta i l tA ih e sn ho o e e t r ha e u a e ta t y o hr m s a g o p o vn-y l/ lr v o e l ts n i g p t r c p o s t tr g l t l t - g

v r u r wt n e eo me t l e p n e n p a t. R Y e u ae e e i l t n a d f we n i 2 a o sg o h a d d v l p n a s o s si ln s C 2 r g lt sd— t a i n o r g t i r o o l i me i Al - n '￣

bdp i. c rig o h o srai D q ec s f R 2i Ar io s ( i s Acod e n ev t ee NA s u n e C Y bdp i NM 1 0 2 )C iee ab g o s n tt c v e o n a s 0 3 0, hn s b a e c _

( Y1 6 8 ) n r i a u ( 8 9 7 )te o lg i r w r d s n d F r emoete at lD A 7 6 9 a d￣s anp s AJ 8 7 9,h moo y r s ee ei e . ut r r,h ra e NA B c h p me g h p i o RY s a l e r m o a fC 2 wa mp i d fo t tlRNA f Br ia rp s b p. a a“ s d i f o ￣sc a a L. u s r p T u a”b — C y RT P R. h b an d T e o ti e

s q e c o 7 i e tyt RY f 5io ssa do e 7 ie t a f ie e a b g n asc e u n es ws8% d n i C 2o Ar d p i n v r% d ni t t t Chn s b a e dBrs ia h t o a 9 y t oh o c a

np sMoe v r h e i amet s o s utdi o h at x rs o etr H7 WI 2I b t y au. ro e, e p caf g n nt ce t e ln pes n co G WG ( y e t s l r wa c r n t p e i v p ) Ga wa c o i g tc n l g . h x r s i n v c o

s e u ae y 3 S p o o e n x e t dt a s r t n r n s l i g lnn h oo e y T ee p e so e t r wa g lt db 5 r m tra d e p ce t n c p to p i n r o r i i c

h i i RY ar n C 2RNA n treet eih rn RY e e p a di efr t ee t n oh n C 2g n . Ke wo d Cr p o h o eg neCR y rs y t c r m e Y2, RNAi Pl n x e son v c o , a te pr s i e t r

隐花色素 (rpoho, R是首先在拟南芥 cy tcrme C Y)

隐花色素是一种类光解酶的蓝光受体 (i, Ln

0 0。对拟南芥的 C YI C Y R和 R 2功能的研究中发现的一种吸收蓝光和近紫外光 ( .的光受 2 0 )目前， uv A)

体，它是一种黄素蛋 ((r g d ny2 0)隐花比较深入，￣Bi s n e, 0 1。 g a Ol它们在功能上既有重叠又有差别。 R蛋 C Y1色素广泛存在于包括植物、动物包括人在内的真核白介导蓝光信号调节的时钟节奏 (o rea.l9) Smest1 9 8, , R Go生物的细胞内。隐花色素具有向光性、抑制幼茎伸而 C Y2蛋白调节去黄化反应并控制开化时间( u e a.1 9; i e a. 19; a ge 1 2 0 )在 t 1 9 8 Ln t 1 9 8 Y n t . 0 0。 , , a,长、叶绿体迁移、激气孔张开和调节基因表达等功刺

R和 RY能，与光敏色素一起调节植物的去黄化反应、周期 C Y1 C 2的 C端包含一个可变区域，即功能光反应和光形态建成等反应。区域 ( n t 1 2 0 )为蛋白~蛋白结合区，有 Ya ge a. 0 0,,具

基金项目：本研究由国家自然科学基金项目(0 7 5 0 3 70 7 ) 3 5 1 1;0 3 0 8资助