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一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法与流程

花匠小妙招
2025-01-05 07:50

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法。

背景技术：

软枣猕猴桃(actinidiaarguta)，别名：软枣子，圆枣子，圆枣，奇异莓，为猕猴桃科猕猴桃属多年生木质藤本植物。主要分布于中国、朝鲜、韩国、日本和俄罗斯，软枣猕猴桃资源在我国分布广阔，主要分布于东北、华北、西北及长江流域各省。目前，我国的软枣猕猴桃品种主要由东北野生植株驯化培育而成。软枣猕猴桃果实中富含维生素、类胡萝卜素及镁、铁、钾、钠等多种营养成分，有“水果之王”的美称，具有滋补强身、生津润肺等作用。liu等人研究了软枣猕猴桃中的粗生物碱(aaca)对物理抗疲劳和运动性能影响，结果表明，粗生物碱(aaca)可以提高小鼠的耐力和握力(liuyy,liucj.antifatigueandincreasingexerciseperformanceofactinidiaargutacrudealkaloidsinmice[j].journaloffoodanddruganalysis,2016,24(4):738-745)。刘延吉等人研究发现，软枣猕猴桃含有多糖及其苷、黄酮及其苷、挥发油及脂类等多种成分，其中红色品系的维生素c、总黄酮和总糖含量最高(刘延吉,朱雪媞,田晓艳.辽宁地区软枣猕猴桃果实性状次生物质鉴定及营养分析[j].沈阳农业大学学报,2010,41(2):228-230.)。祝儒刚等人研究发现，吉林地区的野生软枣猕猴桃中，多糖含量是中华猕猴桃(actinidiachinensis)的4倍，黄酮含量是中华猕猴桃的7.6倍，维生素c和各种矿物元素均高于中华猕猴桃(祝儒刚,孙艳頔,陈罡，等.软枣猕猴桃与中华猕猴桃功能成分比较研究[j].辽宁大学学报,2017,1:59-64.)。因此，软枣猕猴桃是一种优质的水果，驯化栽培及开发利用的潜在经济价值非常高。软枣猕猴桃的开发、研究、利用历史悠久，在宋朝的《开宝本草》中已有记载，现代研究认为，软枣猕猴桃在清除自由基，预防癌症，抗衰老，增强免疫功能和抗辐射等方面有重要作用(孔硕.软枣猕猴桃开发利用前景[j].中国园艺文摘,2014,11:179-181.)。国外对软枣猕猴桃的开发利用较早，并且进行了大量的研究工作。kataoka等人对日本野生软枣猕猴桃的遗传资源进行了调查，以确定倍性变异及其地理分布。研究发现从不同地区采集的软枣猕猴桃中，有二倍体、四倍体、六倍体、七倍体、八倍体(kataokai,mizugamit,kimjg,etal.ploidyvariationofhardykiwifruit(actinidiaarguta)resourcesandgeographicdistributioninjapan[j].scientiahorticulturae,2010,3:409-414.)。日本学者利用野生软枣猕猴桃资源培育出多个软枣猕猴桃品种，如‘峰香’、‘香粹’、‘里泉’、‘山形娘’、‘雪娘’、‘花之井’、‘茂绿’、‘光香’、‘信山’等(郭晓成.日本选育的猕猴桃品种简介[j].中国果树,2006,3:63-64.)。韩国软枣猕猴桃栽培始于20世纪90年代，筛选出‘chiak’、‘congsan’和‘gwangsan’3个纯软枣猕猴桃品种。在上个世纪50年代，中国农业科学院特产研究院就对如何驯化野生软枣猕猴桃进行了研究，至今，我国选育出软枣猕猴桃品种和优良品系主要有：‘魁绿’、‘桓优一号’、优系‘8401’、‘宝贝星’、‘佳绿’等(李爽,宋庆超,王勇.我国软枣猕猴桃开发利用概况[j].黑龙江科技信息,2016,9:270-271.)。

组织培养可以在短期内快速繁殖出大量个体，因此成为实现大规模生产的必要手段。关于软枣猕猴桃的组织培养已经开展了一定的研究，但是不同软枣猕猴桃种质间在激素的种类、浓度等方面有着一定的区别。‘赤焰’软枣猕猴桃是近年发展的新品种，软枣猕猴桃果实通常为绿色，而赤焰软枣猕猴桃果实成熟时带红色，富含花青素类，且商品性较好。其具有丰产、果实鲜艳、口感好、9-10月果实成熟、可忍受-25℃的低温等特点而日益受到消费者欢迎。但是目前该品种的供苗量不足，已成为限制其发展的因素之一，但是苗木供应是限制的主要问题。因此，探索适合‘赤焰’软枣猕猴桃的快繁技术，对于该品种的繁殖及推广应用等具有重要的意义。目前关于软枣猕猴桃的组培技术已有一定的研究和应用，但是用于赤焰的组培，存在以下缺点：组培苗节间不伸长、分枝少、叶片卷曲等问题。

技术实现要素：

为解决上述技术问题，本发明公开了一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法，可以促进茎的节间伸长，分枝增加，叶片伸展，提高组培效率。

本发明通过以下技术方案实现：

一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选取：采集赤焰软枣猕猴桃枝条，扦插使其萌发，当幼枝长到4-6cm时，将茎段切割下作为外植体；

(2)初代培养：将步骤(1)得到的外植体用0.1％升汞消毒5-15分钟后，经无菌水冲洗后，去除破坏的外植体末端，将枝条切成一叶一芽2-3cm的茎段，接种在初代培养基中，在恒温光照箱中培养30-35天后，进行初代培养得到初代赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(3)继代培养：将步骤(2)初代培养得到的初代赤焰软枣猕猴桃组培苗长至4-6cm时，截取初代茎尖和茎段接种于继代培养基中，在恒温光照箱中培养30-35天，进行继代培养得到继代赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(4)生根培养：将步骤(3)继代培养得到的继代赤焰软枣猕猴桃组培苗长至4-6cm时，接种于组培瓶的生根培养基中，在恒温光照箱中培养30-35天后生根，得到赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(5)打开组培瓶口炼苗1-3d后，将步骤(4)生根培养得到的赤焰软枣猕猴桃组培苗移栽到营养土中，即完成赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖。

所述步骤(2)-(4)中的恒温光照箱中的培养条件为：培养温度为26±2℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为16h/d。

所述步骤(2)中的初代培养基为：ms+6-ba0.5-1.5mg·l-1+naa0.05-0.15mg·l-1；

优选地，所述步骤(2)中的初代培养基为：ms+6-ba0.8-1.2mg·l-1+naa0.08-0.12mg·l-1；

进一步优选地，所述步骤(2)中的初代培养基为：ms+6-ba1.0mg·l-1+naa0.1mg·l-1。

所述步骤(3)中的继代培养基为：ms+ga30.05-0.15mg·l-1+6-ba0.5-1.5mg·l-1+iba0.05-0.15mg·l-1；

优选地，所述步骤(3)中的继代培养基为：ms+ga30.08-0.12mg·l-1+6-ba0.8-1.2mg·l-1+iba0.08-0.12mg·l-1；

进一步优选地，所述步骤(3)中的继代培养基为：ms+ga30.1mg·l-1+6-ba1.0mg·l-1+iba0.1mg·l-1。

所述步骤(4)中的生根培养基为：1/2ms+iba0.15-0.25mg·l-1；

优选地，所述步骤(4)中的生根培养基为：1/2ms+iba0.18-0.23mg·l-1；

进一步优选地，所述步骤(4)中的生根培养基为：1/2ms+iba0.2mg·l-1。

本发明的有益效果是：

(1)针对现有技术中培养基所培养出的赤焰组培苗具有分蘖少，植株矮小，不伸展的缺点，本发明提供的赤焰软枣猕猴桃组培方法，通过选取培养基中的激素种类及其浓度配比可以实现植株正常生长，分蘖多，叶片伸展，85％以上的组培苗都有2-3个分蘖。

(2)本发明提出的赤焰软枣猕猴桃组织培养基针对性强，适用性好，生长速度快，成活率高。组培苗30天可生长2-4厘米，生根率可达94％以上，移栽成活率92％以上。

(3)本发明使用少量外植体材料即可实现大批量扩繁赤焰软枣猕猴桃苗的目的，组培周期仅为80-90天即可炼苗移入温室，降低了育苗成本，提高了育苗效率，可实行规模化生产。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

实施例1一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法

一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：

(1)外植体的选取：采集赤焰软枣猕猴桃枝条，扦插使其萌发，当幼枝长到4-6cm时，将茎段切割下作为外植体；

(2)初代培养：将步骤(1)得到的外植体用0.1％升汞消毒5分钟后，经无菌水冲洗后，去除破坏的外植体末端，将枝条切成一叶一芽2-3cm的茎段，接种在初代培养基中，在恒温光照箱中培养30天后，进行初代培养得到初代赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(3)继代培养：将步骤(2)初代培养得到的初代赤焰软枣猕猴桃组培苗长至4-6cm时，截取初代茎尖和茎段接种于继代培养基中，在恒温光照箱中培养30天，进行继代培养得到的继代赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(4)生根培养：将步骤(3)继代培养得到的继代赤焰软枣猕猴桃组培苗长至4-6cm时，接种于组培瓶的生根培养基中，在恒温光照箱中培养30天后生根，得到赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(5)打开组培瓶口炼苗1d后，将步骤(4)生根培养得到的赤焰软枣猕猴桃组培苗移栽到营养土中，即完成赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖繁殖，即完成赤焰软枣猕猴桃组培的快速繁殖。

所述步骤(2)-(4)中的恒温光照箱中的培养条件为：培养温度为26±2℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为16h/d。

所述步骤(2)中的初代培养基为：ms+6-ba0.5mg·l-1+naa0.15mg·l-1；

所述步骤(3)中的继代培养基为：ms+ga30.15mg·l-1+6-ba0.5mg·l-1+iba0.05mg·l-1。

所述步骤(4)中的生根培养基为：1/2ms+iba0.25mg·l-1；

实施例2一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法

(1)外植体的选取：采集赤焰软枣猕猴桃枝条，扦插使其萌发，当幼枝长到4-6cm时，将茎段切割下作为外植体；

(2)初代培养：将步骤(1)得到的外植体用0.1％升汞消毒15分钟后，经无菌水冲洗后，去除破坏的外植体末端，将枝条切成一叶一芽2-3cm的茎段，接种在初代培养基中，在恒温光照箱中培养35天后，进行初代培养得到初代赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(3)继代培养：将步骤(2)初代培养得到的初代赤焰软枣猕猴桃组培苗长至4-6cm时，截取初代茎尖和茎段接种于继代培养基中，在恒温光照箱中培养35天，进行继代培养得到的继代赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(4)生根培养：将步骤(3)继代培养得到的继代赤焰软枣猕猴桃组培苗长至4-6cm时，接种于组培瓶的生根培养基中，在恒温光照箱中培养35天后生根，得到赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(5)打开组培瓶口炼苗3d后，将步骤(4)生根培养得到的赤焰软枣猕猴桃组培苗移栽到营养土中，即完成赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖。

所述步骤(2)-(4)中的恒温光照箱中的培养条件为：培养温度为26±2℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为16h/d。

所述步骤(2)中的初代培养基为：ms+6-ba1.5mg·l-1+naa0.05mg·l-1；

所述步骤(3)中的继代培养基为：ms+ga30.05mg·l-1+6-ba1.5mg·l-1+iba0.15mg·l-1。

所述步骤(4)中的生根培养基为：1/2ms+iba0.15mg·l-1；

实施例3一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法

(1)外植体的选取：采集赤焰软枣猕猴桃枝条，扦插使其萌发，当幼枝长到4-6cm时，将茎段切割下作为外植体；

(2)初代培养：将步骤(1)得到的外植体用0.1％升汞消毒10分钟后，经无菌水冲洗后，去除破坏的外植体末端，将枝条切成一叶一芽2-3cm的茎段，接种在初代培养基中，在恒温光照箱中培养30天后，进行初代培养得到初代赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(3)继代培养：当步骤(2)初代培养得到的初代赤焰软枣猕猴桃组培苗长至4-6cm时，截取初代茎尖和茎段接种于继代培养基中，在恒温光照箱中培养30天，进行继代培养得到的继代赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(4)生根培养：当步骤(3)继代培养得到的继代赤焰软枣猕猴桃组培苗长至4-6cm时，接种于组培瓶的生根培养基中，在恒温光照箱中培养30-35天后生根，得到赤焰软枣猕猴桃组培苗；

(5)打开组培瓶口炼苗2d后，将步骤(4)生根培养得到的赤焰软枣猕猴桃组培苗移栽到营养土中，即完成赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖。

所述步骤(2)-(4)中的恒温光照箱中的培养条件为：培养温度为26±2℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为16h/d。

所述步骤(2)中的初代培养基为：ms+6-ba0.8mg·l-1+naa0.12mg·l-1。

所述步骤(3)中的继代培养基为：ms+ga30.12mg·l-1+6-ba0.8mg·l-1+iba0.12mg·l-1。

所述步骤(4)中的生根培养基为：1/2ms+iba0.18mg·l-1。

实施例4一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法

其方法基本同实施例3，与实施例3的差别在于：

所述步骤(2)中的初代培养基为：ms+6-ba1.2mg·l-1+naa0.08mg·l-1。

所述步骤(3)中的继代培养基为：ms+ga30.08mg·l-1+6-ba1.2mg·l-1+iba0.08mg·l-1。

所述步骤(4)中的生根培养基为：1/2ms+iba0.23mg·l-1。

实施例5一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法

其方法基本同实施例3，与实施例3的差别在于：

所述步骤(2)中的初代培养基为：ms+6-ba1.0mg·l-1+naa0.1mg·l-1。

所述步骤(3)中的继代培养基为：ms+ga30.1mg·l-1+6-ba1.0mg·l-1+iba0.1mg·l-1。

所述步骤(4)中的生根培养基为：1/2ms+iba0.2mg·l-1。

对比例1一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法

基本方法同实施例3，与实施例3的差别在于：步骤(3)中的继代培养基中不含ga3。

对比例2一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法

基本方法同实施例3，与实施例3的差别在于：步骤(3)中的继代培养基为ms+ga30.03mg·l-1+6-ba1.0mg·l-1+iba0.1mg·l-1。

对比例3一种赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法

基本方法同实施例3，与实施例3的差别在于：步骤(3)中的继代培养基为ms+ga30.18mg·l-1+6-ba1.0mg·l-1+iba0.1mg·l-1。。

实验例

实施例1-5和对比例1-3的赤焰软枣猕猴桃的组培快速繁殖方法中的赤焰软枣猕猴桃组培苗的生根率、移栽成活率、有2-3个分蘖的比例如下表所示：

从上表中数据可以看出，本发明实施例1-5提供的方法繁殖的赤焰软枣猕猴桃组培苗的生根率在94％以上，移栽成活率均在92％以上，其中有2-3个分蘖的比例在85％以上，高于对比例1-3。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础；当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。