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一种快速繁殖白芨试管苗的方法.pdf

花匠小妙招
2025-01-10 10:42

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1、(10)申请公布号 CN 104255496 A (43)申请公布日 2015.01.07 CN 104255496 A (21)申请号 201410489589.6 (22)申请日 2014.09.23 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人江苏农林职业技术学院地址 212400 江苏省镇江市句容市长江路 3 号 (72)发明人史俊席刚俊徐超蒋新宇杨鹤同 (74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所 ( 普通合伙 ) 32204 代理人肖明芳 (54) 发明名称一种快速繁殖白芨试管苗的方法 (57) 摘要本发明公开了一种快速繁殖白芨试管苗的方法，它是将白。

2、芨的种子经萌发培养、原球茎分化培养、鳞茎诱导培养和驯化后，得到白芨幼苗的方法。与现有技术相比，本发明方法具有萌发率高、培养时间短、整齐性好和变异率小的优点，具有良好的市场前景。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书1页说明书8页 (10)申请公布号 CN 104255496 A CN 104255496 A 1/1 页 2 1. 一种快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 选取白芨人工授粉后 120d 的塑果，依次用去污剂和水清洗后移入接种室内，在。

3、超净工作台上用 75v/v酒精水溶液浸泡 45 60s 后，放置于氯化汞水溶液中浸泡 10 15min，得到白芨无菌塑果； (2) 将步骤 (1) 中所得的白芨无菌塑果在超净台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在 22 25、 80 120 转 /min 的条件下，培养 45d，过滤得到白芨原球茎； (3) 将步骤 (2) 中所得的白芨原球茎接种于原球茎分化培养基上，在 25 28、光照强度 1000 1500lux、光照时间 11 13h/d 的条件下培养 75d，得到白芨小苗； (4) 将步骤 (3) 中所得的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，。

4、在 25 28、光照度 1000 1500lux、光照时间 11 13h/d 的条件下培养 70d，选取基部形成直径 4 7mm 鳞茎的白芨； (5) 将步骤 (4) 中选取的白芨用水清洗后，移置到铺有驯化栽培基质的苗床上，遮阴 80，驯化 6 个月后，即可进行大田移栽。 2. 根据权利要求 1 所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤 (1) 中，所述的去污剂为普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的质量分数为 0.1 0.15。 3. 根据权利要求 1 所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤 (2) 中，所述的液体培养基为的组。

5、分为： N6 培养基 + 萘乙酸 0.5 1.0mg/L+ 蔗糖 25 30g/L， pH5.6 5.8。 4.根据权利要求1所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤(2)中的培养条件为：在 22 25条件下，前 7d 给予暗培养，之后光照强度为 1000 1500lux，光照时间 11 13h/d。 5. 根据权利要求 1 所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤 (3) 中，所述的原球茎分化培养基的组分为： N6 培养基 + 萘乙酸 0.5 1.5mg/L+ 蔗糖 25 30g/L+ 香蕉泥 60 80g/L+ 琼脂 4.5 6g/L， pH。

6、5.6 5.8。 6. 根据权利要求 1 所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤 (4) 中，所述的鳞茎诱导培养基的组分为： 1/2MS 培养基 + 萘乙酸 1 2mg/L+ 蔗糖 25 30g/L+ 香蕉泥 60 80g/L+ 琼脂 4.5 6g/L， pH 5.6 5.8 ； 7. 根据权利要求 1 所述的快速繁殖白芨试管苗的方法，其特征在于，步骤 (5) 中，所述的的驯化栽培基质由田园土、泥炭土和蛭石以重量比 1 ： 1 ： 0.5 组成。权利要求书 CN 104255496 A 2 1/8 页 3 一种快速繁殖白芨试管苗的方法技术领域 0001。

7、本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种快速繁殖白芨试管苗的方法。背景技术 0002 白芨， ( 学名： Bletilla striata) 又名连及草、甘根、白给、箬兰、朱兰、紫兰、紫蕙、百笠，多年生草本球根植物 ( 块根 )，植株高 18 60 厘米。主要分布在中国、日本以及缅甸北部。主要花期在春季，但依各地气候之不同，晚冬至夏初都可能开花。白芨有广泛的药用价值及园林价值。主要用于收敛止血，消肿生肌。花有紫红、白、蓝、黄和粉等色，可盆栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。 0003 白芨喜温暖、阴湿的环境，如野生山谷。

8、林下处。稍耐寒，长江中下游地区能露地栽培。耐阴性强，忌强光直射，夏季高温干旱时叶片容易枯黄。宜排水良好含腐殖质多的沙壤土。白芨常生长于较湿润的石壁、苔藓层中，常与灌木相结合，或者生长于林缘、草丛、有山泉的地方，亦生于海拔1003200米的常绿阔叶林下，栋树林或针叶林下，在北京和天津有栽培。白芨生长的石头均是砂岩类，这样白芨才能吸收到毛管水、从而牢牢地吸在上面。 0004 长期以来，白芨市场主要依靠野生资源。由于用途的广泛、需求量的增加以及价格的高涨，导致资源被掠夺式采挖，加上生态环境的破坏，野生资源日渐枯竭，白芨已成为我国二级保护植物。因此，。

9、在快速繁殖白芨方面，有着的良好的市场前景。发明内容 0005 本发明所要解决的技术问题，是提供一种快速繁殖白芨试管苗的方法。 0006 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下： 0007 一种快速繁殖白芨试管苗的方法，它包括以下步骤： 0008 (1) 选取白芨人工授粉后 120d 的塑果，依次用去污剂和水清洗后移入接种室内，在超净工作台上用75v/v酒精水溶液浸泡4560s后，放置于氯化汞水溶液中浸泡10 15min，得到白芨无菌塑果； 0009 (2) 将步骤 (1) 中所得的白芨无菌塑果在超净台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在 22。

10、 25、 80 120 转 /min 的条件下，培养 45d，过滤得到白芨原球茎； 0010 (3) 将步骤 (2) 中所得的白芨原球茎接种于原球茎分化培养基上，在 25 28、光照强度 1000 1500lux、光照时间 11 13h/d 的条件下培养 75d，得到白芨小苗； 0011 (4) 将步骤 (3) 中所得的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，在 25 28、光照度 1000 1500lux、光照时间 11 13h/d 的条件下培养 70d，选取基部形成直径 4 7mm 鳞茎的白芨； 0012 (5) 将步骤 (4) 中选取的白芨用水清洗后，移置到铺有驯。

11、化栽培基质的苗床上，遮阴 80，驯化 6 个月后，即可进行大田移栽。 0013 其中，步骤 (1) 中，所述的去污剂为普通家用洗衣液；所述的氯化汞水溶液中，氯说明书 CN 104255496 A 3 2/8 页 4 化汞的质量分数为 0.1 0.15。 0014 其中，步骤 (2) 中，所述的液体培养基为的组分为： N6 培养基 + 萘乙酸 0.5 1.0mg/L+ 蔗糖 25 30g/L， pH5.6 5.8。 0015 其中，步骤 (2) 中的培养条件为：在 22 25条件下，前 7d 给予暗培养，之后光照强度为 1000 1500lux，光照时。

12、间 11 13h/d。 0016 其中，步骤 (3) 中，所述的原球茎分化培养基的组分为： N6 培养基 + 萘乙酸 0.5 1.5mg/L+ 蔗糖 25 30g/L+ 香蕉泥 60 80g/L+ 琼脂 4.5 6g/L， pH5.6 5.8。 0017 其中，步骤 (4) 中，所述的鳞茎诱导培养基的组分为： 1/2MS 培养基 + 萘乙酸 1 2mg/L+ 蔗糖 25 30g/L+ 香蕉泥 60 80g/L+ 琼脂 4.5 6g/L， pH 5.6 5.8 ； 0018 其中，步骤 (5) 中，所述的的驯化栽培基质由田园土、泥炭土和蛭石以重量比 1 ： 1 ： 0.5 组成。

13、。 0019 有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优点： 0020 1、白芨塑果消毒后，置于超净工作台上用解剖刀剖开塑果，取出种子，接种到步骤 (2)中液体培养基上，采用N6培养基并配以生长素NAA 0.51.0mg/L，在转速为80120 转 /min 条件下进行培养，与现有的白芨种子萌发培养基相比，该方法腋芽萌发时间缩短了一倍，且萌发率高 (80以上 )，整齐性好，变异率小于 1。 0021 2、步骤 (4) 所述的鳞茎诱导培养基中，采用 1/2MS( 大量元素减半 ) 并配以生长素 NAA1 2mg/L，与传统的培养技术相比，该方法能更好更快的。

14、促进白芨小苗基部膨大，形成鳞茎， 70d 内即可使白芨组培苗的鳞茎膨大到直径 4 7mm。具体实施方式 0022 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。 0023 实施例 1 ：一种高效快速繁殖白芨试管苗的方法，该方法包括以下步骤： 0024 (1)9 月，剪取白芨人工授粉后 120d 的塑果，用去污剂清洗 10min，再用流水冲洗 10min，带入接种室，在超净工作台上用75v/v酒精浸泡4560s，再放置于氯化汞水溶液中浸泡； 002。

15、5 (2) 将步骤 (1) 得到的白芨无菌塑果在超净工作台上用解剖刀剖开，取出种子，接种于液体培养基上，在 22 25、 120 转 /min 的条件下，培养 20d，种子开始萌发， 45d 后，通过显微镜观察，约 85的种子形成直茎 0.7 1mm 的原球茎，变异率约为 0.8，滤出原球茎备用；其中，光照条件为：前 7d 给予暗培养，以后光照度为 1000 1500lux、光照时间 12h/d ；所述的液体培养基组成为：萘乙酸 0.5mg/L+ 蔗糖 30g/L+N6 培养基 +pH5.8 ； 0026 (3) 将步骤 (2) 得到的白芨原球茎置于原。

16、球茎分化培养基中，在 25 28、光照度 1000 1500lux、光照时间 12h/d 的条件下培养 75d，白芨长至 5cm 高左右；其中，所述的原球茎分化培养基组成为：萘乙酸 1.0mg/L+ 蔗糖 30g/L+N6 培养基 + 香蕉泥 80g/L+ 琼脂 6g/L+pH5.8 ； 0027 (4) 将步骤 (3) 中得到的白芨小苗接种到鳞茎诱导培养基中，在 25 28、光照度 1000 1500lux、光照时间 12h/d 的条件下培养 70d，白芨的基部膨大形成鳞茎，经过测说明书 CN 104255496 A 4 3/8 页 5 量，形成的鳞。

17、茎大多直径为 4 7mm，平均直径为 5.81mm，这时可进行驯化移栽，其中，所述的鳞茎诱导培养基组成为：萘乙酸 2mg/L+ 蔗糖 230g/L+ 香蕉泥 80g/L+1/2MS 培养基 + 琼脂 6g/L+pH 5.8 ； 0028 (5) 将步骤 (4) 得到的成苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后，移置铺有驯化栽培基质的苗床上，并遮阴保湿，驯化 6 个月后，即可进行大田移栽。 0029 实施例 2 ： 0030 与实施例 1 基本相同，步骤 (2)、步骤 (3)、步骤 (4) 中种子萌发，原球茎分化培养、鳞茎诱导培养三个阶段分别以表 1 所列培养基组合进。

18、行筛选，以优选最适培养基组合配方。表 1 说明如下： 0031 培养基配方优化主要是设计不同的基础培养基、激素浓度、天然附加物等对培养基进行了优化设计，培养环境为温度 25、光照度 1000 1500lux、光照时间 12h/d 培养室内。 0032 针对生产，不同的培养阶段设计了三组培养基配方，种子萌发阶段主要观察种子萌发的快慢、长势、颜色 ( 翠绿为佳 ) 等指标判断配方是否合理；原球茎分化阶段主要观察白芨原球茎的分化率及分化后小苗高度(越高越好)、粗度(越粗越好)、玻璃化程度(越低越好 ) 等指标判断配方是否合理；鳞茎诱导培养阶段，主要通关。

19、观察白芨苗基部的膨大程度 ( 越大越好 )、玻璃化程度 ( 越低越好 )、颜色等指标来判断配方的好坏。通过观察和各项指标的测定，并用 “” 和 “” 的多少代表配方的好坏，越多表示越好，比要低一个等次。 0033 表 1 培养基配方筛选 0034 说明书 CN 104255496 A 5 4/8 页 6 0035 说明书 CN 104255496 A 6 5/8 页 7 0036 说明书 CN 104255496 A 7 6/8 页 8 0037 说明书 CN 104255496 A 8 7/8 页 9 0038 试验表明，种子萌发阶段 ( 步骤 2)27 种。

20、配方组合中，基础培养基和激素组合范围为萘乙酸 0.5 1.0mg/L+ 蔗糖 25 30g/L+N6 培养基，在 22 25条件下，液体震荡培说明书 CN 104255496 A 9 8/8 页 10 养(120转/min)时，种子萌发率高、生长快且整齐性好，是较适宜的组合配方组合，培养20d 种子开始萌发， 45d 时，超过 80的种子萌发并形成 0.7 1.2mm 大小的原球茎；原球茎分化培养阶段 ( 步骤 3)36 种配方组合中，基础培养基、激素组合范围为萘乙酸 1.0 2.0mg/ L+ 香蕉汁 60 80g/L+ 蔗糖 25 30g/L+N6 培养基 + 琼脂 4.5 6g/L 培养基范围内，原球茎分化率高，分化后，苗的生长势良好、生长速度快、玻璃化程度低， 75d 左右，苗的高度可达5cm左右且较为健壮；鳞茎诱导阶段(步骤4)，结果表明，萘乙酸1.03.0mg/L+香蕉汁 60 80g/L+ 蔗糖 25 30g/L+1/2MS 培养基 + 琼脂 4.5 6g/L 为优选培养基配方组合，培养 70d 后，白芨苗基部膨大，形成 4mm 7mm 的鳞茎，大大提高了移栽成活率。说明书 CN 104255496 A 10 。