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检测喀西茄抗根结线虫病SacMi基因的分子标记及引物和应用.pdf

花匠小妙招
2025-05-19 15:28

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710722898.7 (22)申请日 2017.08.22 (71)申请人江苏省农业科学院地址 210014 江苏省南京市钟灵街50号 (72)发明人周晓慧鲍生有刘军杨艳庄勇 (74)专利代理机构南京经纬专利商标代理有限公司 32200 代理人张素卿 (51)Int.Cl. C12Q 1/68(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称检测喀西茄抗根结线虫病SacMi基因的分子标记及引物和应用 (57)摘要本发明公开了一。

2、种检测喀西茄抗根结线虫病SacMi基因的分子标记及引物和应用，特异性标记SacMi1100的序列为： SEQIDNO： 1。所述的分子标记PCR引物，上游引物SAMI02F为SEQID NO： 2，下游引物为SEQIDNO： 3。标记SacMi1100 能够明显区分喀西茄抗根结线虫病基因SacMi和栽培茄品种中的Mi同源基因，可以在苗期对喀西茄与栽培茄的种间杂交后代群体进行抗根结线虫病基因SacMi的快速检测，提高育种效率。权利要求书1页说明书3页序列表2页附图1页 CN 107287343 A 2017.10.24 CN 107287343 A 1.一种检测。

3、喀西茄抗根结线虫病SacMi基因的分子标记，其特征在于，该分子标记 SacMi1100的序列为： SEQ ID NO： 1。 2.权利要求1所述分子标记的PCR引物，其特征在于：上游引物SAMI02F为SEQ ID NO： 2，下游引物SAMI02R为SEQ ID NO： 3。 3.权利要求1所述分子标记在检测喀西茄抗根结线虫病SacMi基因中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是指在苗期对喀西茄与栽培茄的种间杂交后代群体进行抗根结线虫病基因SacMi的检测中的应用。 5.权利要求2所述PCR引物的应用。 6.权利要求2所述PCR引物在喀西茄抗根结线虫病SacM。

4、i基因检测中的应用。权利要求书 1/1 页 2 CN 107287343 A 2 检测喀西茄抗根结线虫病SacMi基因的分子标记及引物和应用一、技术领域 0001 本发明涉及一种检测喀西茄抗根结线虫病SacMi基因的分子标记及引物和应用，属于植物育种技术领域，专用于茄子育种材料中来源于喀西茄的抗根结线虫病基因SacMi 的分子检测。二、背景技术 0002 茄子(Solanum melongena L.)起源于亚洲东南亚热带地区，古印度为最早驯化地。我国栽培茄子的历史悠久，一般认为中国是茄子第二起源地。茄子是我国栽培较广的茄果类蔬菜之一，它不仅具有较高的营养价值，。

5、且食用方法也多种多样，是一种可以鲜干结合、周年供应、经济实惠的大宗蔬菜，深受广大生产者和消费者的欢迎。茄子根结线虫病是一种重要的土传性病害，近年来，随着设施茄子生产的发展和连作的不可避免，该病已成为茄子设施栽培的重要病害，发生和危害愈加严重，生产上对抗根结线虫病茄子品种的需求非常迫切。 0003 种质资源的评价和利用是开展抗病育种研究的基础。研究表明，茄子栽培种种质资源中缺乏抗根结线虫病基因，高抗根结线虫病的基因存在于茄属近缘野生种质中，其中茄子的野生种喀西茄(S.aculeatissimum)具有高抗根结线虫病的优良特性。因此，发掘利用喀西茄的抗。

6、根结线虫病基因对茄子品种抗病性的改良具有重要意义。三、发明内容 0004 技术问题 0005 本发明的目的在于根据喀西茄SacMi基因的核苷酸序列及其与番茄、辣椒抗根结线虫基因同源序列间的差异，设计PCR引物，获得SacMi基因的PCR特异标记，用于对种间杂交后代中SacMi基因的分子检测。 0006 技术方案 0007 本发明采取如下技术方案： 0008 一种检测喀西茄抗根结线虫病SacMi基因的分子标记，其特征在于，该分子标记 SacMi1100的序列为： SEQ ID NO： 1。 0009 所述的分子标记的PCR引物，其特征在于：上游引物SAMI02F为SEQ 。

7、ID NO： 2，下游引物SAMI02R为SEQ ID NO： 3。 0010 所述分子标记的应用，其特征在于，是指在苗期对喀西茄与栽培茄的种间杂交后代群体进行抗根结线虫病基因SacMi的快速检测中的应用，提高育种效率。 0011 所述PCR引物的应用是指所述PCR引物在喀西茄抗根结线虫病SacMi基因检测中的应用。 0012 有益效果 0013 标记SacMi1100能够明显区分喀西茄抗根结线虫病基因SacMi和栽培品种中的Mi 说明书 1/3 页 3 CN 107287343 A 3 同源基因，可以在苗期对喀西茄与栽培茄的种间杂交后代群体进行抗根结线虫病基因 SacMi的快。

8、速检测，提高育种效率。四、附图说明 0014 图1喀西茄与苏州牛角、徐州长茄、七叶茄的PCR检测结果 0015 图2SAMI02F与SAMI02R引物组合的PCR检测结果，其中M为DNA分子量标准， 1-24 依次为喀西茄、喀西茄苏州牛角(F1)、成都墨茄、短把黑、二民茄、杭州红茄、济南六叶茄、宁波藤茄、潘茄、平湖小茄、七叶茄、三月茄、苏州牛角、芜湖白茄、西安绿茄、小黄茄、一口茄、徐州长茄、扬州长茄、大圆茄、面条茄、徐州早圆茄、马路茄、蚌埠青长茄。其中喀西茄引自荷兰种质资源库，其余栽培茄材料引自国家种质资源中期库。五、具体。

9、实施方式 0016 以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。 0017 1)引物设计 0018 播种喀西茄的种子，待幼苗长至4片真叶期时，取面积约1cm2的细嫩叶片，采用 CTAB 法提取DNA， DNA浓度调整为50ng/ul。 0019 根据喀西茄SacMi基因的全长核苷酸cDNA序列及其与番茄、辣椒抗根结线虫基因同源序列间的差异，设计引物： 0020 上游引物SAMI02F为5 -CAGCGAAGTGGAAGTGATGA-3 ， 0021 下游引物SAMI02R为5 -GCAAAGTGAACCAAGTGCAA-3 ，产物大小1107bp。 0022 2)PCR扩增和产物。

10、检测 0023 采用20ul的反应体系，包括2Taq Mix(上海浦迪生物技术公司)10ul，引物 SAMI02F (10pmol/L)0.5ul，引物SAMI02R(10pmol/L)0.5ul， DNA50ng。 PCR程序参数为： 94 预变性3min，然后94变性30s， 60退火45s， 72延伸45s，共35个循环，最后72延伸 7min。 PCR产物中加入加样缓冲液，取10ul点样于1.5的含EB的琼脂糖凝胶中， 100V 电压下电泳1小时，利用凝胶成像系统拍照(图1)。对喀西茄和3个栽培茄品种包括苏州牛角、徐州长茄和七叶茄进行扩增。结果发现，引物组合。

11、SAMI02F和SAMI02R仅在喀西茄中扩增出清晰的1100bp左右的条带，而在另外3个栽培茄材料中无明显扩增，说明该引物组合可以特异性地检测喀西茄抗根结线虫病基因SacMi。根据扩增产物的大小，将该标记命名为 SacMi1100。 0024 3)分子标记验证 0025 进一步以喀西茄、喀西茄苏州牛角(F1)和22个公知公用栽培品种(成都墨茄、短把黑、二民茄、杭州红茄、济南六叶茄、宁波藤茄、潘茄、平湖小茄、七叶茄、三月茄、苏州牛角、芜湖白茄、西安绿茄、小黄茄、一口茄、徐州长茄、扬州长茄、大圆茄、面条茄、徐州早圆茄、马路茄、蚌埠青长。

12、茄)为材料，利用引物组合SAMI02F和SAMI02R进行PCR检测(图2)。结果表明，引物组合SAMI02F和SAMI02R仅在喀西茄和喀西茄苏州牛角(F1) 两份材料中有明显的扩增产物，而在其它材料中则没有明显扩增，说明该引物组合可以特异性区分喀西茄和感病茄子品种，同时也能从喀西茄苏州牛角(F1)中检测出喀西茄抗根结线虫基因 SacMi。说明书 2/3 页 4 CN 107287343 A 4 0026 SEQ ID NO： 1： 0027 AGAATTAAGTTATGACCATTTACCAGATCAAGTGAAGCCATGCTTGCTTTACCTTGCAAGTTATC。

13、CAAA GGATACTGCTTTGTTAACCTTTATGTTGATAGATTTTTTGCATCCTGAAGGACTTGTCAAGCAGACACA GATGAAGAGTGCGGAAGAAGTGATGAAGGTTTATTTGGATAACTTAGTTTCCAGTAGCTTGGTAATTC TTTTCAATGAGACTTGCCAACTTCATGATCTTGTGCATGACTTTTGTTTGATTAAAGCAACAAAGGAA AAGTTGTTTGGCCGAATAAGTTCAATTGCTCCATCTTCTTCTTCTTCAGATTTGATGCCACGTATAGTGA CCATTGATTATAACAG。

14、CGAGTTCTTTGGGCTTAACAATTTCTTCCTGTTCAATTCAAATAAGAAAAGGC ATTCGGGTAAACACCTGTATTCTTTGTGTATAACCGGAGACGACTTGGACGACTCTCTTTCTGATACAT TTCACCCAAGACACTTGAGGCTTCTTAGAGTGTTGAAACTGGATGCCTCTCTTTTCATGGTGAAAGAT TCTTTGCTGAGTGAAATATGCATGTTGAATCATTTGAGGTACTTACAGATTGCGACAAAAGTTAAATCT CTGCCTGCTTCTTTCTCAAACCTTTGGAATCTAGAAA。

15、CCCTAGTGGTGGAAAATTTTGGAACAACCTT GATGGTACTATTACCGAGAATTTGGGGTCTTGTAAAGTTGCGAATGTTGCTTATAGATCAATGTTGTTTC TTTGATTTGGATGCAGATGAATCAATACTTATAGCAGAGGACACAAAGTTAGAGAAGTTGAGAATTTT TCAGGCACCCGTGCTTTCCTATTCGAAAGGCACAGAGGATATTTTCAAAAGGTTTCCTAATCTTCAAA ATCTTGTATTTGTTCTCAAGGAATCATCAACAGAACAACATTGGTTCCCAAAATTGGAT。

16、TTCCTAACTC AACTAGAACATCTCGGTGTAGAATTTGAAAGACACAGTGGGTTCTCTGCAGCGACAAATTGGTCGTG GGATTTTCATTTCCCTTTGAGTTTGAAAGAATTGCACTTGGTTCACTTTGCTCTTACATCGGATGCACTA TCAACAAT 0028 SEQ ID NO： 2： SAMI02F 0029 CAGCGAAGTGGAAGTGATGA 0030 SEQ ID NO： 3： SAMI02R 0031 GCAAAGTGAACCAAGTGCAA。说明书 3/3 页 5 CN 107287343 A 5 SEQUE。

17、NCE LISTING 江苏省农业科学院检测喀西茄抗根结线虫病SacMi基因的分子标记及引物和应用说明书 3 PatentIn version 3.3 1 1107 DNA 喀西茄特异性标记SacMi1100 (1).(20) 1 agaattaagt tatgaccatt taccagatca agtgaagcca tgcttgcttt accttgcaag 60 ttatccaaag gatactgctt tgttaacctt tatgttgata gattttttgc atcctgaagg 120 acttgtcaag cagacacaga tgaagagtgc ggaagaagt。

18、g atgaaggttt atttggataa 180 cttagtttcc agtagcttgg taattctttt caatgagact tgccaacttc atgatcttgt 240 gcatgacttt tgtttgatta aagcaacaaa ggaaaagttg tttggccgaa taagttcaat 300 tgctccatct tcttcttctt cagatttgat gccacgtata gtgaccattg attataacag 360 cgagttcttt gggcttaaca atttcttcct gttcaattca aataagaaaa ggcattc。

19、ggg 420 taaacacctg tattctttgt gtataaccgg agacgacttg gacgactctc tttctgatac 480 atttcaccca agacacttga ggcttcttag agtgttgaaa ctggatgcct ctcttttcat 540 ggtgaaagat tctttgctga gtgaaatatg catgttgaat catttgaggt acttacagat 600 tgcgacaaaa gttaaatctc tgcctgcttc tttctcaaac ctttggaatc tagaaaccct 660 agtggtggaa a。

20、attttggaa caaccttgat ggtactatta ccgagaattt ggggtcttgt 720 aaagttgcga atgttgctta tagatcaatg ttgtttcttt gatttggatg cagatgaatc 780 aatacttata gcagaggaca caaagttaga gaagttgaga atttttcagg cacccgtgct 840 ttcctattcg aaaggcacag aggatatttt caaaaggttt cctaatcttc aaaatcttgt 900 atttgttctc aaggaatcat caacagaaca。

21、 acattggttc ccaaaattgg atttcctaac 960 tcaactagaa catctcggtg tagaatttga aagacacagt gggttctctg cagcgacaaa 1020 ttggtcgtgg gattttcatt tccctttgag tttgaaagaa ttgcacttgg ttcactttgc 1080 tcttacatcg gatgcactat caacaat 1107 2 20 DNA 序列表 1/2 页 6 CN 107287343 A 6 SAMI02F (1).(20) 2 cagcgaagtg gaagtgatga 20 3 20 DNA SAMI02R (1).(20) 3 gcaaagtgaa ccaagtgcaa 20 序列表 2/2 页 7 CN 107287343 A 7 图1 图2 说明书附图 1/1 页 8 CN 107287343 A 8 。