漳州水仙单染色体文库的构建及其AFLP标记的研究
【摘要】：本研究以漳州水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)为材料,应用染色体微切割、微分离、微克隆技术,分离其随体染色体(第7染色体),构建单染色体DNA文库,并结合AFLP分子标记技术,建立随体染色体的分子标记。主要研究结果如下:漳州水仙为三倍体,2n=3x=30,x=10。其中3条第7染色体均为随体染色体,但3条随体染色体形态不同。当染色体预处理时间较长时,其中一条随体收缩过短,光学显微镜下难以辨认。用玻璃针显微分离出漳州水仙两条随体染色体,经LA-PCR扩增得到200～2500bp的DNA片段;Southern杂交表明漳州水仙随体染色体DNA已经被成功扩增;将扩增产物克隆到PMD18-T载体中,约获得5.0×10~5个和3.7×10~5个克隆,经EocRⅠ、HindⅢ酶切鉴定插入片段大小为300～2000bp。将LA-PCR技术与单酶切AFLP分子标记结合,以LA-PCR接头序列为依据设计引物,通过变性聚丙烯酰胺胶电泳与银染技术,建立了两条染色体的分子标记,并且选取17对引物,对两条随体染色体扩增出来的谱带进行分析,其中两组谱带相同条带比率约为58.8%,初步判断两条随体染色体并非同源染色体。研究结果为探索漳州水仙的起源与进化提供必要的依据。
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