类黄酮3，5羟基化酶基因的克隆及其转化菊花的初步研究
摘要目前在花色基因工程育种中蓝色花卉因其色彩高雅、稀少而成为研究的重点。其中翠雀素衍生的花色素苷的积累被认为是产生蓝色花的三个必备条件之一。因此向非蓝色花植物中引入编码翠雀素的关键基因成为培育蓝色花卉品种的一个重要手段。类黄酮羟基化酶一’’’被认为是合成翠雀素糖苷的关键酶。大多数天然蓝色花是由于’’基因的有效表达通过导入外源基因为蓝色花的培育提供了可能性。本研究根据基因库登陆’’序列设计特异引物从瓜叶菊中扩增’’基因—扩增得到大约大小的特异片断将其克隆到载体一。经菌落和酶切检测并测序确认得到了类黄酮羟基化酶’’基因。查尔酮合成酶基因是植物体类黄酮合成的关键基因。启动子具有很强的花瓣特异表达特性在花卉的花色基因工程育种中有着重要的应用价值。本实验用改良法提取矮牵牛的根据基因库中登陆序列设计特异引物从矮牵牛中扩增启动子。测序结果经比对分析可以确认得到了启动子。利用方法将’’基因与启动子从一载体上克隆下来再将两个片断连接后再连入植物表达载体。用转化农杆菌。建立菊花的转化体系值为左右的农杆菌菌液浸染时间为共培养可提高农杆菌转化效率在抗生素浓度为的培养基上可以有效地筛选转基因菊花。关键词’’克隆转化愈伤组织
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