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一点红多糖和生物碱的提取分离及生物活性研究

花匠小妙招
2024-11-19 01:01

　　一点红,为菊科,别名红叶草、红花草、石青红、七十二枝花等,是我国南方地区经常使用的传统中草药。全球约有100种,主要分布于亚洲和非洲热带,少数产于美洲。在我国大多数产于福建、贵州、江西、云南、广西、广东等地区,其主要生长于山坡、田间及路旁。在我国其可作为药食两用山野蔬菜被人们所熟知,性味：苦,凉。功能主治：湿热腹泻、感冒发烧、咽喉肿痛、口腔溃疡、肺炎、乳腺炎、肠炎、急性扁桃体炎、胆囊炎、小儿上呼吸道感染及支气管肺炎等多种疾病,同时它也是花红片、醒脾养儿冲剂的主要原料药材。本论文对一点红多糖及生物碱的提取工艺进行了优化。并对一点红多糖进行抑菌活性研究,测出其最小抑菌浓度。同时将一点红总生物碱按照pH由小到大以及极性由小到大的顺序分段,对各段进行抗肿瘤活性研究。研究内容主要有以下几个方面：1.一点红多糖提取工艺研究本论文采用了常用的水提法对一点红多糖进行提取。对单因素温度、料液比、提取次数、提取时间进行了研究,得到最优单因素条件：温度80℃,料液比1：30,提取次数2次,提取时间2h；并进行了4个因素3个水平的正交实验考察,以提取率作为考察指标,得到最优工艺条件：温度70℃,料液比1：30,提取次数2次,提取时间2h。验证最佳工艺,其粗多糖提取物中多糖的提取率为3.38%。2.克氏千里光碱的分离利用乙醇提取和酸碱处理得到的总生物碱初品,经二氯甲烷萃取后,使用硅胶柱进行洗脱,利用薄层色谱法(TLC)跟踪检测各梯度洗脱部位,选取乙酸乙酯-甲醇(2：1)洗脱部位用半制备高效液相色谱仪做进一步分离,利用波谱分析的方法鉴定分离出的单体化合物的结构,确定该物质为克氏千里光碱。3.一点红总生物碱提取工艺研究以分离得到的单体克氏千里光碱为对照品,采用分析高效液相色谱仪做标准曲线。对乙醇提取一点红总生物碱的工艺进行了优化,考察了乙醇体积分数、提取温度、提取时间和提取次数四个因素进行了研究,得到最优单因素条件：乙醇体积分数为85%,提取温度为85℃,提取时间为3h,提取次数为2次；并进行了4个因素3个水平的正交实验考察,得到最优工艺条件：乙醇体积分数为85%,提取温度为85℃,提取时间为2h,提取次数为3次。验证最佳工艺,其总生物碱提取率为0.87mg/g。4.多糖抑菌活性研究按照确定的最佳工艺条件,对提取出的多糖进行抑菌活性研究,并测定其最小抑菌浓度。结果表明,一点红多糖对枯草芽孢杆菌有抑菌活性,其MIC为25mg／mL。5.生物碱抗肿瘤活性研究利用乙醇提取出和稀盐酸处理得到的一点红总生物碱初品,按照pH由小到大以及极性由小到大的顺序分段,得到11个不同部位,并对这些部位进行体外抗肿瘤活性研究。结果发现,在高浓度时,除pH为8部位外,其余各部位均对细胞株HepG2有较好的增殖抑制活性；在低浓度时,只有pH为7的部位对细胞株HepG2有增殖抑制活性；pH为5、pH为7和pH为9三个部位在高浓度时对细胞株Hep3B和耐药细胞株R-HepG2均有增殖抑制活性。