首页 > 分享 > 含粘质沙雷氏菌几丁质酶基因的植物转化质粒pBG1112 构建和水稻遗传转化

含粘质沙雷氏菌几丁质酶基因的植物转化质粒pBG1112 构建和水稻遗传转化

农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2003,11渊2冤院121~126*基金项目:湖南省教委高校“九五”重点科研和湖南省生命科学联合中心科研课题。何迎春女1972年生博士。现工作单位湖南中医学院基础课部生物化学教研室长沙410007收稿日期2002-04-18接受日期:2002-09-08

·研究论文·含粘质沙雷氏菌几丁质酶

基因的植物转化质粒pBG1112构建和水稻遗传转化何迎春1李小湘2高必达1(1.湖南农业大学植物保护学院长沙410128;2.湖南省水稻研究所长沙410125)摘要:将一个2.8kb的CaMV35S启动子/SchiA编码区/Nos终止区融合基因插入到植物转化载体pCAMBIA1301的多克隆酶切位点得到1个14.6kb的新植物转化质粒pBG1112,用花器介导法转化水稻

经PCR检测初步证实已将目的基因整合到受体植物的基因组中。一部分转基因T3代潮霉素抗性阳性植株对水稻纹枯病(

)和稻瘟病

的抗性较非转化对照增强。RT-PCR表明抗病性植株为阳性而不抗病的植株为阴性。将RT-PCR产物测序后用BLAST软件分析序列可知该序列为细菌几丁质酶基因核苷酸序列而不是植物几丁质酶基因的核苷酸序列。T4代转基因水稻的几丁质酶活力高于对照未转基因植株表明转入的外源几丁质酶基因能正常表达。关键词细菌几丁质酶基因转化水稻纹枯病稻瘟病ConstructionofaNewPlantTransformationVectorpBG1112withaChitinaseGene

from

andItsGeneticTransformationinRiceHeYingchun1LiXiaoxiang2GaoBida1(1.CollegeofPlantProtection,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128,China;2.HunanRiceResearchInstitute,Changsha410125,China)

A2.8kbCaMV35Spromoter/SchiAcodingregion/Nosterminatorfusiongenewasinsertedintothepolycloningsiteofa11.8kbbinaryvectorpCAMBIA1301toproduceanew14.6kbplasmidpBG1112,whichwasusedinrice(

L.)transformationbyfloralorgan-mediatedmethod.T3riceplantswerescreenedbyhygromycinsolutionandthepositiveplantswereexaminedbyPCRforpresenceoftransgeneandbyRT-PCRformaturedmRNA.BioassayforsomeoftheT3transgenicriceplantswhichdisplayedbothhygromycin-resistanceandRT-PCRpositiveshowedtheincreasedresistancetoricesheathblight(

)andriceblast

.ThesequencingresultshowedthatthenucleotideacidsequencesofRT-PCRproductswerethesameasthatoftransgeneanalyzedbyBLASTsoftware.ChitinaseactivityofT4transgenicricewashigherthanthatofnon-transgenicrice,whichshowedthatthetransferredexogenouschitinasegenecouldbeexpressednormally.

bacterialchitinasegene;transformation;rice;ricesheathblight,riceblast纹枯病和稻瘟病是影响水稻生产最严重的两大真菌病害。纹枯病在高发病年可造成高达50%的减产而目前尚无理想的抗病品种亦无合适的抗源用于抗病育种[1]。稻瘟病高发病区颗粒无收生产中虽然有一些抗稻瘟病品种但推广几年后会因出现新的致病小种而使抗性丧失。几丁质酶EC32114是一种以几丁质聚乙酰氨基葡萄糖为底物的水解酶。而真菌细胞壁都含有几丁质其中子囊菌、担子菌和半知菌的细胞壁含有几丁质和葡聚糖接合菌的细胞壁含几丁质和聚氨基葡萄糖故该酶成为当今抗真菌病基因工程研究的焦点[2]。Lin等[3]报道将水稻CHI11几丁质酶基因转入水稻中出现了几丁质酶活性显著增强对纹枯病抗性提高的植株。Nishizawa等[4]也报道转单个几丁质酶基因的水稻植株比对照更抗稻瘟病。已用于作物转化的几丁质酶基因主要来源于烟PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn

相关知识

用于蛙类免疫的粘质沙雷氏菌免疫增强剂.pdf
菊花ChCHI基因的克隆、表达分析及遗传转化
以对潮霉素抗性为筛选标记的棉花遗传转化
第十二三章 植物细胞的遗传转化
花色相关基因的克隆鉴定及兰花遗传转化研究
农杆菌介导的真菌遗传转化及其应用
菊花转录因子CmTGAs的克隆及同源遗传转化研究
第三章 植物基因工程技术及应用
兰花遗传转化技术研究进展
【一起学】农杆菌浸花法如何转化拟南芥?

网址: 含粘质沙雷氏菌几丁质酶基因的植物转化质粒pBG1112 构建和水稻遗传转化 https://m.huajiangbk.com/newsview672207.html

所属分类:花卉
上一篇: 动画1中华虎凤蝶
下一篇: 蝴蝶兰病症及预防教案.doc