根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化体系的建立
《农业生物技术学报》 2005年06期
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根癌农杆菌介导的向日葵遗传转化体系的建立
郝彦玲 朱本忠 朱鸿亮 栾春光 罗云波 段晓昱 开通知网号
【摘要】：采用携带gus和hpt基因双元表达载体pCAMBIA1301的根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)EHA105对向日葵(Helianthusannuus)品种新葵杂6号的茎尖分生组织进行遗传转化,以共培养后7d外植体的gus基因纯合表达频率为指标测定转化率。结果表明,潮霉素适宜的筛选浓度为10mg/L,根癌农杆菌侵染浓度OD600=0.8,果胶酶(0.05%)与纤维素酶(0.1%)共同消化外植体30min,共培养温度24℃,共培养培养基中添加乙酰丁香酮(ACS)100μmol/L,向日葵茎尖gus基因纯合表达率高达32.8%。对抗性苗进行PCR和Southernblot检测,初步证明T-DNA上的hpt基因已整合向日葵的基因组中。
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