豚草花粉过敏原的分析、鉴定与纯化
猿史洪涛李陶陈东风援肝细胞色素氧化酶Ⅰ在非酒精性脂肪肝大鼠形成中的作用允援第三军医大学学报圆园园远圆愿圆员远园原员远圆源悦匀韵陨允匀运陨酝栽晕运陨酝杂藻贼葬造援韵增藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣皂蚤贼燥糟澡燥灶鄄凿则蚤葬造贼澡蚤燥则藻凿燥曾蚤灶则藻凿怎糟贼葬泽藻葬灶凿责藻则燥曾蚤则藻凿燥曾蚤灶Ⅲ蚤灶澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬泽允援粤灶贼蚤糟葬灶糟藻则砸藻泽圆园园圆圆圆远粤猿猿猿员原猿猿猿缘援缘匀粤粤孕粤杂粤蕴韵匀运再蕴魧晕陨耘酝陨酝孕粤哉晕哉蕴晕藻贼葬造援耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼藻灶扎赠皂藻泽蚤灶葬泽贼则燥糟赠贼蚤糟遭则葬蚤灶贼怎皂燥则泽允援月则葬蚤灶孕葬贼澡燥造圆园园猿员猿圆员缘缘原员远源援远蕴陨晕悦韵蕴晕阅栽粤蕴陨耘酝粤阅陨耘酝栽韵晕陨杂杂耘晕运云藻贼葬造援栽澡藻贼澡蚤燥则藻凿燥曾蚤灶原贼澡蚤燥则藻凿燥曾蚤灶则藻凿怎糟贼葬泽藻泽赠泽贼藻皂燥增藻则原藻曾责则藻泽泽蚤燥灶蚤灶澡怎皂葬灶糟葬灶糟藻则允援粤灶贼蚤糟葬灶糟藻则砸藻泽圆园园猿圆猿猿月圆源圆缘原圆源猿猿援收稿日期圆园员园原园源原园圆编辑王冰
赣州市科技计划项目编号赣市科发圆园园怨猿员号原员员怨▲湖南中医药大学圆园园愿级在读博士研究生现工作单位赣南医学院病原生物学教研室江西赣州猿源员园园园△通信作者。教授博士湖南中医药大学博士研究生导师豚草花粉过敏原的分析、鉴定与纯化谢水祥员▲朱清仙圆邬玉兰猿刘志刚猿韩立民源△员湖南中医药大学中西医结合学院长沙源员园圆园愿圆南昌大学医学院南昌猿远园园园远猿深圳大学过敏反应及免疫学研究所广东深圳缘员愿园远园源赣南医学院江西赣州猿源员园园园【摘要】目的对豚草花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。方法提取豚草花粉粗提液杂阅杂原孕粤郧耘分离其蛋白组分并测定分子量宰藻泽贼藻则灶原遭造燥贼贼蚤灶早鉴定其变应原组分通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果豚草花粉有猿园条蛋白带其中主要条带有怨条苑园噪阅葬、源园噪阅葬为其特异性变应原。经离子交换层析纯化出豚草花粉相对分子量为源园噪阅葬的变应原主要分布在Ⅰ峰。结论豚草花粉粗提液中主要变应原为苑园噪阅葬、源园噪阅葬蛋白组分。【关键词】豚草花粉变应原分析变态反应疾病被世界卫生组织宰匀韵认为是当前世界性的重大卫生学问题世界各国变态反应性疾病的总发病率约为缘豫耀圆园豫此类疾病包括过敏性哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎等是临床常见病、多发病。在引起变态反应性疾病的致病因素中气传致敏花粉是导致季节性变态反应疾病的最重要因素员而豚草花粉是一种比较重要的过敏原。圆园园怨年员员月至圆园员园年员月本研究通过杂阅杂原孕粤郧耘、宰藻泽贼藻则灶原遭造燥贼贼蚤灶早和离子交换层析对其进行分离、鉴定为临床过敏性患者的诊断及治疗提供依据。员材料与方法员援员材料豚草花粉采自江西南昌市郊区特异患者血清由深圳大学过敏反应与免疫学研究所提供所有血清均来自花粉皮试阳性的患者。员援圆主要仪器与试剂垂直电泳槽、转膜电泳槽酝燥凿藻造员园园园辕缘园园、凝胶成像及分析系统为灾陨蕴月耘砸蕴韵哉砸酝粤栽公司产品层析柱、快速蛋白液相层析系统云孕蕴悦为粤皂藻则泽澡葬皂孕澡葬则皂葬糟蚤葬公司产品丙烯酰胺为月月陨公司产品十二烷基硫酸钠杂阅杂为月陨韵原砸粤阅公司产品亚甲基双丙烯酰胺月蚤泽、过硫酸铵粤孕、四甲基乙二铵栽耘酝耘阅、三羟甲基氨基甲烷栽则蚤泽、联苯二胺阅粤月为粤酝砸耘杂悦韵公司产品上样缓冲体系、蛋白酝葬则噪藻则和预染蛋白酝葬则噪藻则为酝月陨云藻则皂藻灶贼葬泽公司产品生物素标记的陨早耘二抗、辣根过氧化物酶标记的亲和素链霉亲和素为运蚤则噪藻早葬葬则凿驭孕藻则则赠蕴葬遭燥则葬贼燥则蚤藻泽公司产品硝酸纤维膜晕悦膜为郧藻造皂葬灶造葬遭燥则葬贼燥则赠公司产品阅耘粤耘原悦藻造造怎造燥泽藻阅耘原缘圆为粤皂藻则泽澡葬皂孕澡葬则鄄皂葬糟蚤葬公司产品。其余均为国产分析纯试剂。员援猿豚草花粉粗提液的提取取员园早豚草花粉用液氮在研钵中充分研磨加入悦燥糟葬’泽氯化钠缘早碳酸氢钠圆郾苑缘早结晶酚源早加蒸馏水员园园园皂蕴责匀愿郾圆搅拌提取圆源澡离心员园皂蚤灶取上清浓缩备用。操作均在源益进行。员援源豚草花粉粗提液的杂阅杂原孕粤郧耘用杂阅杂原孕粤郧耘体系分离豚草花粉粗提液蛋白组分测定其分子量。分离胶为员圆豫浓缩胶为缘豫考马斯亮蓝砸原圆缘园染色液染色脱色后用凝胶成像及分析系统拍照并分析其分子量。员援缘花粉粗提液的免疫学特性鉴定用月陨韵原砸粤阅转移槽将凝胶中的蛋白条带转移至硝酸纤维膜上用栽月杂洗涤圆次缘皂蚤灶辕次将膜用员豫月杂粤封闭液封闭源益冰箱过夜用含园郾园缘豫吐温原圆园的栽月杂栽洗膜猿次缘皂蚤灶辕次加一抗用员豫月杂粤原栽月杂栽进行员颐怨稀释猿苑益孵育圆澡同上洗膜猿次后加入员颐员园园园稀释的二抗原生物素室温孵育圆澡同上洗膜猿次后加入员颐员园园园稀释的链酶亲和素原匀砸孕室温孵育圆澡同上洗膜缘次阅粤月显色摄像后分析其相对分子质量。员援远豚草花粉粗提液的离子交换层析与检测豚草花粉提取液用园郾园圆皂燥造辕蕴栽则蚤泽原匀悦造责匀苑郾圆缓冲液透析圆源澡进行阅耘粤耘原悦藻造造怎造燥泽藻阅耘原缘圆离子交换层析在云孕蕴悦层析控制系统下用阅耘粤耘原悦藻造造怎造燥泽藻阅耘原缘圆离子交换层析柱以园郾园圆皂燥造辕蕴责匀苑郾圆的栽则蚤泽·怨远园圆·广东医学圆园员园年愿月第猿员卷第员远期郧怎葬灶早凿燥灶早酝藻凿蚤糟葬造允燥怎则灶葬造粤怎早援圆园员园灾燥造援猿员
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