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一种构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法

花匠小妙招
2024-11-30 20:54

摘要：本发明公开了一种构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，所述方法通过基因编辑技术将小鼠Lhpp基因敲除后构建成模型，所述模型为Lhpp基因敲除小鼠，所述Lhpp基因敲除是将小鼠通过双gRNA在Lhpp的基因两端进行切割后制备Lhpp敲除的小鼠。本发明在Lhpp基因敲除小鼠构建成功的基础上发现Lhpp基因敲除可以导致小鼠肠道菌群紊乱，最终导致小鼠抗肿瘤免疫能力减弱，并且通过多种方法证实Lhpp基因敲除小鼠会导致小鼠肠道上皮结构紊乱，定植细菌分布改变，最终影响了细胞毒性T细胞的肿瘤浸润，抑制机体的抗肿瘤免疫能力。

主分类号：

C12N15/85(2006.01)(突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体)

权利要求：

1.一种构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于所述肿瘤为肺癌、肝癌或结肠癌，所述方法通过基因编辑技术将小鼠Lhpp基因敲除后构建成模型，所述模型为Lhpp基因敲除小鼠，所述Lhpp基因敲除是将小鼠通过双gRNA在Lhpp的基因两端进行切割后制备Lhpp敲除的小鼠。 2.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，构建肠道上皮结构紊乱模型。 3.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，构建肠道上皮厚度降低和隐窝数目减少模型。 4.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，构建肠道菌群紊乱模型，包括ANOSIM相似性，PCA相似性，PCoA相似性和NMDS相似性维度进行评估表现出肠道菌群紊乱。 5.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，构建肠道螺旋杆菌属(Turicibacter)、副苏特雷拉菌属(Parasutterella)和文肯菌属(Rikenella)细菌的丰度显著降低，而弯曲杆菌属(Campylobacteria)、鼠尾草菌属(Muribaculum)和产氧光合细菌属(Oxyphotobacteria)细菌的丰度显著升高的肠道菌群紊乱模型。 6.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，构建在CD3阳性的细胞群中IFNγ+CD8+T细胞比例降低的动物模型。 7.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，构建肠道内容物犬尿酸代谢物含量升高的动物模型。 8.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，构建血清中犬尿酸代谢物含量升高的动物模型。 9.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，构建副苏特雷拉菌丰度与犬尿酸含量显著相关的动物模型。 10.如权利要求1所述的构建肠道菌群分布紊乱和抗肿瘤免疫能力失调模型的方法，其特征在于通过在小鼠中敲除Lhpp基因，小鼠骨髓中，T细胞，B细胞，造血干细胞的比例未发生改变。