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水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因及其引物对和应用的制作方法

花匠小妙招
2025-11-26 15:06

本发明涉及植物生物技术，尤其涉及水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因及其引物对和应用。

背景技术：

1、疏花水柏枝(myricaria laxiflora)是柽柳科、水柏枝属直立灌木，为中国三峡库区特有种，生长于江滩、河岸边。因其长期适应水淹环境，形成了夏秋水淹落叶休眠，冬春退水生长繁殖的特性，具有很强的抗洪水冲击和耐水淹能力，在河岸带固土护坡及生态环境美化修复等方面有着重要的应用价值。因此开展疏花水柏枝调控耐水淹相关基因的功能研究，解析疏花水柏枝耐水淹调控机理，能够为疏花水柏枝耐水淹相关资源的利用提供重要的理论基础。

2、疏花水柏枝调控耐水淹相关基因的功能研究中，经常涉及对基因相对表达量的鉴定分析，需要将靶基因和内参基因同时进行实时荧光定量pcr检测。而内参基因表达的稳定性对于靶基因表达量的分析结果至关重要，会直接影响结果的准确性。因此，筛选鉴定相关内参基因，对在叶片组织中参与疏花水柏枝耐水淹调控的功能基因研究具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明提供一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因、引物对、试剂盒及其应用，能够克服样本制备过程中、检测过程中可能存在的实验差异。

2、本发明提供一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析的方法，操作简单、结果精准，便于大规模操作。

3、本发明还提供一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因的筛选方法，科学合理、操作简单、结果精准，能够筛选得到在水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中表达稳定的内参基因。

4、本发明提供一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因，其中，内参基因为泛素结合酶编码基因，内参基因的核苷酸序列如seq id no:1所示。

5、本发明提供一种泛素结合酶编码基因作为内参基因在水淹胁迫下疏花水柏枝叶片的基因表达分析中的应用，其中，泛素结合酶编码基因的核苷酸序列如seq id no:1所示。

6、本发明提供一种用于扩增泛素结合酶编码基因的引物对，其中，泛素结合酶编码基因的核苷酸序列如seq id no:1所示，引物对包括第一引物和第二引物，第一引物的核苷酸序列如seq id no:2所示，第二引物的核苷酸序列如seq id no:3所示。

7、本发明提供一种上述的引物对在水淹胁迫下疏花水柏枝叶片的基因表达分析中的应用。

8、本发明提供一种试剂盒，其中，试剂盒包括上述的引物对。

9、如上所述的试剂盒，其中，试剂盒还包括水、qrt-pcr缓冲液中的至少一种。

10、本发明提供一种上述的试剂盒在水淹胁迫下疏花水柏枝叶片的基因表达分析中的应用。

11、本发明提供一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析的方法，其中，包括如下步骤：

12、提取水淹胁迫下疏花水柏枝叶片的rna，反转录得到cdna样本；

13、以cdna样本为模板，在同一个qrt-pcr扩增体系中利用靶基因设计得到的引物组和上述的引物对同时扩增靶基因和泛素结合酶编码基因，得到靶基因的ct值和泛素结合酶编码基因的ct值；

14、根据靶基因的ct值和泛素结合酶编码基因的ct值分析靶基因的表达量。

15、如上所述的方法，其中，水淹胁迫的处理时间为6-48h。

16、本发明还提供一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因的筛选方法，其中，包括如下步骤：

17、以肌动蛋白的编码基因、微管蛋白的编码基因、泛素结合酶的编码基因作为候选内参基因，设计扩增候选内参基因用的引物对；

18、提取不同水淹胁迫时间下疏花水柏枝叶片的rna，反转录得到cdna样本；以cdna样本为模板，利用扩增候选内参基因用的引物对进行qrt-pcr检测，得到不同水淹胁迫时间下候选内参基因的对应ct值；

19、分析候选内参基因在水淹胁迫下的表达稳定性；根据不同水淹胁迫时间下候选内参基因的对应ct值和候选内参基因在水淹胁迫下的表达稳定性，确定内参基因。

20、本发明提供一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因。该内参基因为泛素结合酶编码基因，其核苷酸序列如seq id no:1所示。该内参基因在水淹胁迫下的疏花水柏枝叶片中表达稳定，适合作为水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析的内参基因使用，能够克服样本制备过程中、检测过程中可能存在的实验差异，对水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中相关基因表达量的准确鉴定提供了切实帮助，为解析疏花水柏枝叶片的耐水淹调控机理并更好地利用疏花水柏枝耐水淹特性奠定了良好基础。

技术特征：

1.一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因，其特征在于，所述内参基因为泛素结合酶编码基因，所述内参基因的核苷酸序列如seq id no:1所示。

2.泛素结合酶编码基因作为内参基因在水淹胁迫下疏花水柏枝叶片的基因表达分析中的应用，其特征在于，所述泛素结合酶编码基因的核苷酸序列如seq id no:1所示。

3.一种用于扩增泛素结合酶编码基因的引物对，其特征在于，所述泛素结合酶编码基因的核苷酸序列如seq id no:1所示，所述引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的核苷酸序列如seq id no:2所示，所述第二引物的核苷酸序列如seq id no:3所示。

4.权利要求3所述的引物对在水淹胁迫下疏花水柏枝叶片的基因表达分析中的应用。

5.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3所述的引物对。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括水、qrt-pcr缓冲液中的至少一种。

7.权利要求5或6所述的试剂盒在水淹胁迫下疏花水柏枝叶片的基因表达分析中的应用。

8.一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析的方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述水淹胁迫的处理时间为6-48h。

10.一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本发明提供一种水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析用的内参基因及其引物对和应用。该内参基因为泛素结合酶编码基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，在水淹胁迫下的疏花水柏枝叶片中表达稳定，适合作为水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中基因表达分析的内参基因使用，能够克服样本制备过程中、检测过程中可能存在的实验差异，对水淹胁迫下疏花水柏枝叶片中相关基因表达量的准确鉴定提供了切实帮助，为解析疏花水柏枝叶片的耐水淹调控机理并更好地利用疏花水柏枝耐水淹特性奠定了良好基础。

技术研发人员：宿洋,黄桂云,李林宝,吴笛,张海波,梁前艳,肖之强,吴锦华,敦必成
受保护的技术使用者：中国长江三峡集团有限公司
技术研发日：
技术公布日：2025/6/26