同时检测四种病毒的引物、引物对、方法及试剂盒技术
本发明专利技术关于可同时检测选自蕙兰嵌纹病毒(Cymbidium?mosaic?virus；CyMV)、齿舌兰轮斑病毒(Odontglossum?ringspot?virus；ORSV)、胡瓜嵌纹病毒(Cucumber?mosaic?virus；CMV)及番椒黄化病毒(Capsicum?chlorosis?tospovirus；CaCV)的病毒的引物、引物对、方法及试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及病毒的检验技术。具体地讲，本专利技术涉及利用兰花病毒专一性引物及弓I物对同时检测数种兰花病毒的检验技术。
技术介绍
兰花是重要花卉产品，极具经济价值，其中又以蝴蝶兰为主要花卉。例如，台湾的出口量历年来呈现正向成长现象，于2009年出口金额已达20亿台币。兰花跟所有植物一样，于栽培过程中都可能面临病虫害的威胁，而导致生长与质量上的损失。对于大多数感染兰花的病害而言，只要运用传统的防治方法例如施用药剂，均可获得良好的防治效果，唯独由滤过性病毒所感染的病毒病至今仍缺乏有效的治疗对策。因此，病毒造成的病害可说是目前最困扰兰花产业的病害。病毒之所以成为兰花产业上最受关切的病原，其主要原因在于病毒可在兰花植株上造成全株统性感染，使兰株生长缓慢，叶片出现条纹、斑块、坏疽或绿色分布不均的嵌纹病征。有些敏感的品种在花朵上也会出现色泽不均、畸形或提早凋萎等病征，严重损及兰花的商品价值。根据文献的纪录，可以感染兰花的病毒种类至少有28种。但证实在台湾地区发生的只有蕙兰(东亚兰)嵌纹病毒(Cymbidium mosaic virus,简称CyMV)、齿舌兰轮斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,简称0RSV)、古月瓜嵌纹病毒(Cucumber mosaic virus,简称CMV)及番椒黄化病毒(Capsicum chlorosis tospovirus,简称CaCV)等四种，其中又以CyMV及ORSV感染情况最普遍，对兰花产业严重影响。在台湾CaCV感染虽不普遍，但由于其感染蝴蝶兰后造成的黄化轮斑与凹陷坏疽病征首在台湾发现，因此CaC...
【技术保护点】
一种同时检测植物样本中4种病毒感染的方法，其中这些病毒为蕙兰嵌纹病毒(Cymbidium?mosaic?virus；CyMV)、齿舌兰轮斑病毒(Odon?tglossum?ringspot?virus；ORSV)、胡瓜嵌纹病毒(Cucumber?mosaic?virus；CMV)及番椒黄化病毒(Capsicum?chlorosis?tospovirus；CaCV)，该方法包含下列步骤：(a)提供植物样本；(b)提供对于CyMV、ORSV、CMV及CaCV的核酸具有专一性的引物及/或引物对；(c)利用这些引物及/或引物对在可同时扩增这些病毒核酸的条件下对该植物样本进行反转录聚合酶链锁反应(RT?PCR)，以扩增CyMV、ORSV、CMV及CaCV的特异性核酸；及(d)检测经扩增的样本中是否含有这些病毒的核酸。
【技术特征摘要】
2011.10.28 TW 1001394541.一种同时检测植物样本中4种病毒感染的方法，其中这些病毒为蕙兰嵌纹病毒(Cymbidium mosaic virus ;CyMV)、齿舌兰轮斑病毒(Odon tglossum ringspot virus ；ORSV)、胡瓜嵌纹病毒(Cucumber mosaic virus ；CMV)及番椒黄化病毒(Capsicumchlorosis tospovirus ;CaCV),该方法包含下列步骤: (a)提供植物样本； (b)提供对于CyMV、ORSV,CMV及CaCV的核酸具有专一性的引物及/或引物对； (c)利用这些引物及/或引物对在可同时扩增这些病毒核酸的条件下对该植物样本进行反转录聚合酶链锁反应(RT-PCR)，以扩增CyMV、ORSV, CMV及CaCV的特异性核酸；及 (d)检测经扩增的样本中是否含有这些病毒的核酸。2.按权利要求1的方法 ，其中该CyMV的核酸来自CyMV的RNA依赖型RNA聚合酶基因、该ORSV的核酸来自ORSV的RNA依赖型RNA聚合酶基因、该CMV的核酸来自CMV的鞘蛋白基因，及该CaCV的核酸来自CaCV的核鞘蛋白基因。3.按权利要求2的方法，其中: 该对于CyMV具有专一性的引物包括一寡核苷酸，其由下列序列组成:SEQ ID NO:7、SEQID NO:8的序列或与SEQ ID NO:7或SEQID NO:8具90%以上同源性且与CyMV具有专一性的序列；及该对于CyMV具有专一性的引物对包括由SEQ ID NO:7的序列组成的寡核苷酸及由SEQ ID NO:8的序列组成的寡核苷酸； 该对于ORSV具有专一性的引物包括一寡核苷酸，其由下列序列组成:SEQID NO:5、SEQID NO:6的序列或与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6具90%以上同源性且与ORSV具有专一性的序列；及该对于ORSV具有专一性的引物对包括由SEQ ID NO:5的序列组成的寡核苷酸及由SEQ ID NO:6的序列组成的寡核苷酸； 该对于CMV具有专一性的引物包括一寡核苷酸，其由下列序列组成:SEQ ID NO =USEQID NO:2的序列或与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具90%以上同源性且与CMV具有专一性的序列；及该对于CMV具有专一性的引物对包括由SEQ ID N0:1的序列组成的寡核苷酸及由SEQ ID NO:2的序列组成的寡核苷酸； 该对于CaCV具有专一性的引物包括一寡核苷酸，其由下列序列组成:SEQ ID NO:3、SEQID NO:4的序列或与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具90%以上同源性且与CaCV具有专一性的序列；及该对于CaCV具有专一性的引物对包括由SEQ ID NO:3的序列组成的寡核苷酸及由SEQ ID NO:4的序列组成的寡核苷酸。4.按权利要求1的方法，其进一步包括使用内标引物及/或引物对，该内标引物及/或引物对可扩增蝴蝶兰肌动蛋白基因的片段，该引物及/或引物对选自由SEQ IDNO:9、SEQID NO:10,SEQ ID NO =IUSEQ ID NO:12及在可...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄怡仁，陈郁璇，
申请(专利权)人：台湾糖业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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