使用根癌农杆菌和多芽培养物作为外植体开发凤仙花高效植物再生和转化系统。,BMC Plant Biology
背景技术凤仙花(Impatiens walleriana)是最畅销的花卉作物。凤仙花遗传转化引入新的花色或病毒抗性的潜力由于其对组织培养和转化操作的普遍抵抗性而受到限制。我们建立了凤仙花的再生和转化系统，为该作物的遗传改良提供了新的替代方案。结果在开发转基因INSV抗性凤仙花的第一步中，我们使用含有子叶节的下胚轴片段作为外植体开发了一种有效的植物再生系统。通过这种再生系统，80%的外植体在每个初始铺板的外植体上平均产生32.3个细长芽，每个外植体产生多达167个细长芽。生根效率高，在最佳条件下12天内100%的芽生根，使植物在大约8周内再生。利用该再生系统，我们开发了一种有效的农杆菌介导的凤仙花转化方法，使用体外多芽培养物作为外植体和带有 gfp 和 nptII 基因的二元质粒 (pHB2892)。从接种到转基因植株转移到土壤中，12至16周内即可获得转基因凤仙花植株，频率高达58.9%。通过Southern印迹、表型测定和T1分离分析证实了转基因植物。在叶、茎、根、花和果实中观察到转基因表达。转基因植物可育且表型正常。结论 我们报告了一种简单有效的农杆菌介导的凤仙花转化系统的开发。 据我们所知，还没有关于农杆菌介导的凤仙花转化的报道，并有T-DNA稳定整合的实验证据，也没有关于使用体外维持的多芽培养物作为外植体的植物的农杆菌介导的转化方法的报道。该转化系统具有以下优点：1）高效、简单、快速的再生和转化（无需灭菌或温室来种植母株），2）体外操作的灵活性（始终可用），3）均匀和一致使用农杆菌介导和生物射弹方法进行核和质体转化所需的绿色组织外植体，4）无体细胞克隆变异，5）解决了农杆菌接种组织的坏死。
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